AAT Bioquest-mFluor UV375 SE：专为多色流式细胞术应用而开发

AAT Bioquest的mFluor?染料专为多色流式细胞术应用而开发。这些染料具有较大的斯托克斯位移，并且可以很好地被流式细胞仪的激光线激发（例如355nm、405nm、488nm和633nm）。mFluor?UV375（MFUV375）染料的荧光激发和发射最大值分别为~355nm和~375nm。这些光谱特性使它们成为BD Biosciences BUV395的绝佳替代品。mFluor?UV375染料被355nm的紫外激光很好地激发，发射中心约为375nm，与BUV 395使用的379/28nm滤光片组完美匹配。与基于聚合物的BUV 395染料相比，MFUV375是一种很容易与抗体结合的小有机分子。它比BUV395明显更暗，可能用于更亮的标记（如CD4）。

艾美捷AAT Bioquest-mFluor UV375 SE ：

单位大小 1 毫克

目录编号 1135

分子量 782.95

溶剂 DMSO

吸收峰（纳米） 342

校正因子（260 纳米） 0.099

校正因子（280 纳米） 0.138

消光系数（厘米 -1 M -1） 30000

激发（纳米） 351

发射（纳米） 387

量子产率 0.94

H-短语 H303, H313, H333

危害符号 XN

预期用途 仅限研究使用（RUO）

R-短语 R20, R21, R22

储存 冷冻（< -15°C）；尽量减少光照

UNSPSC 12171501

图：顶部 光谱图案是使用4激光光谱细胞仪生成的。空间偏移激光器（355 nm、405 nm、488 nm和640 nm）用于生成四种不同的发射轮廓，然后组合在一起，产生整体光谱特征。底部）用mFluor?UV375抗人CD4缀合物染色的全血细胞的流式细胞术分析。使用极光光谱流式细胞仪在mFluor?UV375特异性UV2-A通道中监测荧光信号。

样品实验方案

该标记方案是为山羊抗小鼠IgG与mFluor? UV375 SE的偶联而开发的。您可能需要根据您的特定蛋白质进行进一步优化。

注意     每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。过度标记蛋白质可能会对其结合亲和力产生不利影响，而染料/蛋白质比例过低的蛋白质偶联物则会导致灵敏度降低。

进行偶联反应

以10:1的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比作为起始点：将5微升的染料库存溶液（溶液B，假设染料库存溶液为10 mM）加入到蛋白质溶液（95微升溶液A）的小瓶中，并有效摇动。假设蛋白质浓度为10 mg/mL，蛋白质分子量约为200KD，则蛋白质的浓度约为0.05 mM。

注意     我们建议使用10:1的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。如果这个比例太低或太高，请分别确定5:1、15:1和20:1的最佳染料/蛋白质比例。

继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

纯化偶联物

以下是一个使用Sephadex G-25柱纯化染料-蛋白质偶联物的例子。

根据制造商的说明准备Sephadex G-25柱。

将反应混合物（来自“进行偶联反应”）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

当样品刚运行到顶部树脂表面下方时，立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

向所需的样品中加入更多的PBS（pH 7.2-7.4）以完成柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质偶联物的分数。

注意     如果立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。

注意     对于长期储存，染料-蛋白质偶联物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

AAT Bioquest-mFluor UV375 SE 文献参考：

Sequential ordering among multicolor fluorophores for protein labeling facility via aggregation-elimination based beta-lactam probes

Authors: Sadhu KK, Mizukami S, Watanabe S, Kikuchi K.

Journal: Mol Biosyst (2011): 1766

Visualizing dengue virus through Alexa Fluor labeling

Authors: Zhang S, Tan HC, Ooi EE.

Journal: J Vis Exp. (2011)

Fluorescent "Turn-on" system utilizing a quencher-conjugated peptide for specific protein labeling of living cells

Authors: Arai S, Yoon SI, Murata A, Takabayashi M, Wu X, Lu Y, Takeoka S, Ozaki M.

Journal: Biochem Biophys Res Commun (2011): 211

Neuroanatomical basis of clinical joint application of "Jinggu" (BL 64, a source-acupoint) and "Dazhong" (KI 4, a Luo-acupoint) in the rat: a double-labeling study of cholera toxin subunit B conjugated with Alexa Fluor 488 and 594

Authors: Cui JJ, Zhu XL, Ji CF, Jing XH, Bai WZ.

Journal: Zhen Ci Yan Jiu (2011): 262

Simultaneous detection of virulence factors from a colony in diarrheagenic Escherichia coli by a multiplex PCR assay with Alexa Fluor-labeled primers

Authors: Kuwayama M, Shigemoto N, Oohara S, Tanizawa Y, Yamada H, Takeda Y, Matsuo T, Fukuda S.

Journal: J Microbiol Methods (2011): 119

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