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EdU细胞增殖检测,试剂盒及全套原料打包放送

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-09-15     
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细胞增殖检测是一种有价值的工具,在细胞生物学和药物筛选研究中有着广泛的应用。它们经常被用于评估正常细胞的健康状况,对于评估新型化疗药物的抗增殖效力和化合物毒性至关重要。我们给大家总结了几种评估细胞增殖的方法,这些方法分别基于跟踪细胞分裂的后代或监测细胞健康的关键参数,包括代谢活动、DNA合成或ATP浓度等指标来检测细胞增殖。

 

细胞增殖检测.png

 

测定细胞增殖的最准确方法是通过DNA复制过程中的BrdU(5-溴-2'-脱氧尿苷)掺入来测量新合成的DNA。或者,可以通过使用 WST、Resazurin或细胞酯酶裂解染料测量代谢活性速率或使用CFSE跟踪细胞分裂的子代来更快速地评估细胞增殖。最终,您可以根据您细胞类型、研究方案和您希望研究的作用机制选择最适合您的细胞增殖检测方法,下表总结了目前常用的检测细胞增殖的几种实验类型:

 

测量细胞增殖的方法:

检测机制要使用的测定和试剂检测平台检测原理
新合成的DNABucculite XdU 检测
Bucculite FdU 检测
BrdU
流式细胞术
荧光显微镜
酶标仪
在S期,胸苷类似物被掺入新合成的 DNA 中,然后使用荧光抗体探针进行检测。
代谢指标WST 和 MTT(比色法)
Resazurin(荧光法)
Calcein AM 染料(荧光法)
酶标仪通过监测代谢活动来间接检测增殖。健康细胞减少可以通过读取底物的吸光值或荧光值来判断。
跟踪细胞分裂的后代CytoTell 染料
CFSE
流式细胞术用荧光示踪染料标记活细胞。随着细胞分裂,荧光染料均匀分布在子细胞之间,导致荧光强度随着每一代细胞逐渐减半。
ATP浓度PhosphoWorksA TP检测
ReadiUse ATP检测
酶标仪死亡或濒死的细胞几乎不含 ATP,因此在细胞裂解物中测得的ATP浓度与细胞数量之间形成严格的线性关系。因此,ATP测定法可用于评估增殖。


DNA合成细胞增殖试验:

 

测量新合成的 DNA是鉴定增殖细胞的最可靠和最精确的方法。实现这一目标的一种方法是在细胞周期的S期将胸苷类似物 BrdU (货号:AAT-17030) 掺入新复制的 DNA 中。然后可以使用荧光标记的抗BrdU抗体检测增殖的BrdU标记的细胞。BrdU染色适用于各种应用,包括IHC、ICC 和ELISA,并且适用于流式细胞术中其他感兴趣的生物标志物染色。我们提供用 PE标记的抗BrdU小鼠单克隆抗体 (货号:AAT-V103305)和未标记的小鼠单克隆抗 BrdU 抗体克隆 Bu20a (货号:AAT-V103300) 和 (货号:AAT-V103295)。

 

BrdU染色虽然高度准确和可重复,但这种方法相当繁琐,因为需要用荧光抗 BrdU抗体进行后续检测才能检测增殖,今天给大家带来一款全新的基于点击化学法检测细胞增殖的试剂盒。

 

基于点击化学的EdU细胞增殖检测货号:AAT-22323
与BrdU检测不同,乙炔基脱氧尿苷 (EdU)核苷细胞增殖检测不依赖于通过抗体来量化新复制的DNA,也不需要进行DNA变性来促进抗体对BrdU标记的核苷的检测。EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子中,随后通过铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应(即点击化学反应,下图)将荧光标记到EdU上面,来快速检测细胞DNA复制活性。

 EdU细胞增殖检测原理.jpg

图 1. EdU细胞增殖检测原理

 

BrdU检测于EdU检测结果对比.png

图2. BrdU检测于EdU检测结果对比

 

由于点击反应利用双正交部分来检测增殖细胞,因此背景干扰最小。更重要的是,由于反应条件温和,EdU细胞增殖分析可保持细胞形态、抗原结合位点和样品完整性,为用户后续多重分析提供了机会。EdU掺入细胞后,点击化学反应和后续洗涤步骤可在60分钟内完成,新复制的DNA可使用常见荧光成像系统或流式细胞仪进行定量。

 

如果您不想购买试剂盒,那么福利来啦,我们可以为您提供极具性价比的生产EdU检测试剂盒的全套原料及标记步骤,助力您的试剂盒开发之旅:

 

EdU细胞增殖检测试剂盒开发原料及建议的Protocol:

 

所需试剂:

1.EdU(货号:10540),乙基乙二醇尿苷核苷

2.Cu-TBTA复合物(货号:21050),点击化学催化剂

3.抗坏血酸(货号:12050)-铜的还原剂

4.叠氮基团标记荧光染料: Sulfo-Cyanine3 azide(货号:A1330), Sulfo-Cyanine5 azide(货号:A3330) , BDP FL azide(11430)

5.PBS、Triton X-100 或 Tween-20


通用的标记流程如下:

1.在所需时间段内用10-20uM EdU孵育细胞/组织;

2.使用含7%甲醛的PBS溶液固定细胞15分钟;

3.用PBS洗涤细胞;

4.用含有2% Triton X-100或0.5% Tween-20的PBS渗透处理30分钟;

5.再次用PBS洗涤细胞;

6.制备显影液: 制备含有2mM Cu-TBTA复合物,5μm叠氮化物标记染料,10mM Tris缓冲液pH 7.4(用于溶解磺化叠氮染料)或含有50%DMSO的100mM TRIS缓冲液(用于溶解非磺化叠氮染料)。 显影液应该是新鲜的,因为铜(I)溶液不稳定;

1.用显影混合物处理细胞30分钟;

2.用PBS洗涤细胞;

3.可选:如果细胞必须用不同的荧光团标记,请使用您的标准方案进行染色

用磺基化的叠氮化物(水溶性),如Sulfo-Cyanine3叠氮化物Sulfo-Cyanine5叠氮化物,效果最好。当使用非磺化叠氮化物如Cyanine5 azideCyanine3 azideBDP FL azide 时,需确保显影液物中的DMSO含量为 50%。如有必要,显影后可用乙醇对细胞进行脱色。

 

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