[干冰]TUBE 2(TAMRA标签)通用染色程序方案

基于已知对泛素具有亲和力的蛋白质结构域，串联泛素结合体（TUBEs）已被开发用于分离和鉴定泛素化蛋白。TUBEs对多泛素链的亲和力比单个泛素结合相关结构域（UBA）高出多达1000倍。此外，TUBEs对多泛素化蛋白具有保护作用，使其即使在低丰度条件下也能被检测到。这些特性有效地“捕获”了处于多泛素化状态的蛋白质。TAMRA-TUBE 2在TUBE 2（货号：UM202）的融合标签上连接了一个TAMRA荧光团（激发波长 = 540 nm，发射波长 = 578 nm）。由于荧光团连接在标签上，因此不会影响串联泛素结合结构域与多泛素链的结合。

艾美捷[干冰]TUBE 2(TAMRA标签)：

货号：UM-0502T-0050  

纯度：通过反相高效液相色谱（RP-HPLC）检测，纯度>95%  

分子量：39,078 Da  

物理状态：液体，含10%甘油的PBS溶液  

数量：50 ug，浓度为X mg/mL（取决于批次号）  

溶解性：未测定  

储存：-80°C。避免反复冻融。

应用：

用于荧光显微镜的细胞/组织化学染色，检测多泛素化蛋白。  

示例图片：C2C12小鼠细胞。红色：TMR-TUBE 2；蓝色：抗泛素单克隆抗体FK2；绿色：DAPI（细胞核）。图片由V. Raz提供，荷兰莱顿大学医学中心）

通用染色程序（最佳条件需由终端用户通过实验确定）：

为了获得可检测的信号，可能需要使用蛋白酶体抑制剂（如MG-132，货号：SI9710）处理细胞，以促进泛素化蛋白的积累。  

使用甲醛（2-4%）固定细胞5-20分钟。  

用PBS洗涤。  

使用0.5% Triton处理10分钟。  

用TMR-TUBEs（推荐起始稀释度为1:500）孵育1小时。

文献参考：

Hjerpe, R, Aillet, F, Lopitz-Otsoa, F, Lang, V, England, P, and Rodriguez, MS., Efficient protection and isolation of ubiquitylated proteins using tandem ubiquitin-binding entities. EMBO Rep. 10,1250-1258 (2009).