Abnova 抗骆驼刺（人源化VHH）亲和树脂FF：精准纯化单域抗体的创新解决方案

骆驼科VHH抗体（也称为单域抗体，sdAb或Ablynx的Nanobody）是一种约110个氨基酸长度的肽链，包含一个重链抗体的一个可变域（一个VHH片段）。与完整抗体一样，骆驼科VHH抗体能够特异性结合到特定抗原上。由于其体积小、生产简单且亲和力高，这种单域抗体在生物技术和治疗研究领域有广泛的应用。然而，它们的序列可能会增加在人体中引发免疫原性和抗药物抗体（ADA）产生的风险，因此，在开发过程中，sdAbs通常会被进行人源化处理。抗人源化VHH亲和树脂FF是为从常用的蛋白表达系统（如细菌、酵母和哺乳动物细胞）中纯化人源化VHH单域抗体而设计的。细胞裂解液中的VHH单域抗体能够特异性地结合到连接在树脂上的抗人源化VHH单克隆抗体上。通过严格的洗涤步骤消除非特异性结合反应，以高回收率洗脱纯化的目标蛋白。表1列出了抗人源化VHH亲和树脂FF的主要特性。

作为Abnova全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Abnova热销产品抗骆驼刺（人源化VHH）亲和树脂FF。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

需要但未提供的材料：

蒸馏水

微量移液器

微量离心管

涡旋混合器

试剂储槽

空柱

血清学移液管（5 mL，10 mL）

细胞裂解缓冲液

蛋白酶抑制剂试剂

缓冲液（表2列出了可用于抗骆驼科VHH亲和树脂FF的必要缓冲液。）

实验步骤：

样本准备

为了获得最佳结果，请按照以下建议进行样本准备。

a. 根据蛋白特性准备样本，优化裂解条件以最小化干扰蛋白结合的因素（见表3）。

b. 样本不应含有任何不溶性颗粒。在纯化前，通过过滤或在4°C下以高速离心10-15分钟以去除不溶性物质。

c. 为防止纯化过程中蛋白降解，样本准备应在冰上进行和/或在细胞裂解过程中向样本中添加蛋白酶抑制剂。

d. 在细胞裂解过程中，添加内切核酸酶以减少因染色体DNA或RNA释放导致的样本黏度增加。

e. 避免频繁冻融。将裂解液/样本分装并保存于-80°C。

树脂准备

a. 将空柱放置在稳固的支撑上；用TBS冲洗柱子一次。

b. 通过轻柔倒置彻底重悬树脂，并立即将适当体积的悬浮液加载到柱子上。建议使用宽口径移液头以便于树脂悬浮液的转移。

c. 用TBS洗涤树脂以平衡树脂，重复3次，每次用3倍柱体积的TBS。让缓冲液通过重力从柱子中排出；不要让树脂变干。

结合步骤

抗人源化VHH亲和树脂FF可以通过不同的方法纯化骆驼科VHH单域抗体，包括柱色谱法、批量结合法以及免疫沉淀（IP）或各种常规中压色谱系统（如AKTA纯化系统）。如果样本体积约为50 mL且人源化VHH单域抗体含量少于8 mg，建议使用2-4 mL沉淀树脂的柱结合形式。对于较大体积的样本，建议使用批量结合形式或AKTA纯化系统（见第8节AKTA纯化系统）以实现快速高效的纯化。对于体积小且蛋白表达水平低的样本，使用免疫沉淀法（见第7节人源化VHH单域抗体的免疫沉淀）。

产品图片：

纯化

从大肠杆菌裂解液中纯化人源化VHH蛋白。泳道：（1）蛋白标记物，（2）全细胞裂解液，（3）流穿液，（4）目标人源化VHH信号域抗体-1（分子量=15 kDa）的洗脱液。

Abnova生产的所有产品，包括重组蛋白和抗体均采用目前国际上最先进的生产和SPF级动物设施。Abnova引进CFS先进的麦胚无细胞蛋白合成系统及独有的全自动蛋白纯化技术，向全球蛋白质学客户提供最高品质的重组蛋白产品。Abnova通过与欧洲的分子生物学实验室（EMBL，Eurpean Molecular Biology Laboratory）共同开发的单克隆抗体生产系统，包括高通量的抗原准备、多位点免疫、自动融合与筛选分析。其中MaxPab技术是Abnova专利的能双重识别平面线性蛋白及三维空间结构上接近的蛋白的抗体技术，非常适合用于免疫学检测，MaxPab抗体以真核表达的全长蛋白作为免疫原，制备纯化而来，具有非常高的免疫识别功能，同时后继的纯化技术也保证了极高的特异性，非常适合免疫学检测。