Testosterone ELISA Kits睾酮ELISA试剂盒测定方案及检测原理

睾丸素，C19H28O2，（4-雄甾-17β-醇-3-酮）是一种来自雄激素群的类固醇激素，存在于哺乳动物、爬行动物、鸟类和其他脊椎动物中1,2。

在哺乳动物中，睾丸素主要在男性的睾丸和女性的卵巢中分泌，尽管肾上腺也分泌少量。它是主要的男性性激素和一种合成代谢类固醇。

在男性中，睾丸素在男性生殖组织如睾丸和前列腺的发展中起着关键作用，同时促进次要性征的发展，如增加肌肉、骨骼质量以及体毛的生长3。在没有睾丸素刺激的情况下，精子发生不会超过减数分裂阶段。此外，睾丸素对于健康和幸福4以及预防骨质疏松症5至关重要。平均而言，成年男性人体产生的睾丸素大约是成年女性人体的十倍，但女性对这种激素更敏感6。睾丸素在血糖稳态和脂质代谢中扮演着重要角色。代谢综合征是一系列倾向于2型糖尿病、动脉粥样硬化和心血管发病率及死亡率的风险因素的聚集。综合征的主要组成部分是内脏肥胖、胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受、血压升高和血脂异常（甘油三酯升高、高密度脂蛋白胆固醇水平低），以及促炎症和促血栓状态。横断面流行病学研究报告了血浆睾丸素与胰岛素敏感性之间的直接相关性，低睾丸素水平与2型糖尿病风险增加相关，这在前列腺癌男性的雄激素剥夺治疗中得到了生动的说明。

大多数脊椎动物中都存在睾丸素。鱼类产生一种略有不同的形式，称为11-酮睾丸素7。其在昆虫中的对应物是蜕皮激素8。这些普遍存在的类固醇表明性激素具有古老的进化历史9。

1. Cox, R. M., & John-Adler, H. B. (2005). Testosterone has opposite effects on male growth in lizards (Sceloporus spp.) with opposite patterns of sexual size dimorphism. Journal of Experimental Biology, 208(24), 4679–4687.

2. Reed, W. L., et al. (2006). Physiological effects on demography: a long-term experimental study of testosterone’s effects on fitness. The American Naturalist, 167(5), 667–683.

3. Mooradian, A. D., et al. (1987). Biological actions of androgens. Endocrine reviews, 8(1), 1–28.

4. Bassil, N., et al. (2009). The benefits and risks of testosterone replacement therapy: a review. Therapeutics and clinical risk management, 5, 427–448.

5. Tuck, S. P., & Francis, R. M. (2009). Testosterone, bone and osteoporosis. In T. H. Jones (Ed.). Advances in the management of testosterone deficiency (vol. 37, 123–132). Sheffield, GB: Karger Publishers.

6. Dabbs, M., & Dabbs, J. M. (2000). Heroes, rogues, and lovers: Testosterone and behavior. New York, NY:McGraw-Hill.

7. Nelson, R. J. (2005). An introduction to behavioral endocrinology (3rd ed.). Sunderland, MA: Sinauer Associates.

8. De Loof, A. (2006) Ecdysteroids: The overlooked sex steroids of insects? Males: The black box. Insect Science,13(5), 325–338.

9. Mechoulam, R., et al. (1984). Estrogens in insects. Experientia, 40, 942–944.

检测原理：

艾美捷Testosterone ELISA Kits睾酮ELISA试剂盒（#K032-H1）使用特定生成的抗体来测量尿液和粪便样本中，或在提取的血清和血浆中的睾丸素及其代谢物。该试剂盒不推荐用于未经提取的血清、血浆或唾液样本。试剂盒能够定量测量在重组缓冲液样本和组织培养基样本中存在的睾丸素。请在进行此测定之前阅读完整的试剂盒说明书。提供了睾丸素标准品以生成测定的标准曲线，所有样本均应从标准曲线上读取。标准品或稀释样本被移液到一个涂有捕获兔抗体的清晰微孔板中。向孔中的标准品和样本中添加睾丸素过氧化物酶缀合物。通过向每个孔中添加多克隆抗体来启动结合反应。经过2小时孵化后，对板进行洗涤并添加底物。底物与结合的睾丸素-过氧化物酶缀合物反应。经过短暂的孵化后，反应被终止，生成的颜色强度在能够测量450纳米波长的微孔板读数器中被检测。在对样本稀释进行适当校正后，使用大多数板读数器提供的软件计算样本中睾丸素的浓度。

Testosterone ELISA Kits睾酮ELISA试剂盒组件：

涂覆式透明96孔板

涂有山羊抗兔IgG的透明塑料微孔板。

试剂盒 K032-H1 或 -H5，1或5个，每个产品编号 X016-1EA，1 x 8条孔板

睾丸素标准品

200,000 pg/mL的睾丸素在特殊稳定溶液中。

试剂盒 K032-H1 或 -H5，70 ?L 或 350 ?L，产品编号 C113-70UL 或 -350UL

DetectX?睾丸素抗体

一种特异于睾丸素的兔多克隆抗体。

试剂盒 K032-H1 或 -H5，3 mL 或 13 mL，产品编号 C111-3ML 或 -13ML

DetectX?睾丸素缀合物 必须储存在 ≤ -20°C。

一种在特殊稳定溶液中的睾丸素-过氧化物酶缀合物。

试剂盒 K032-H1 或 -H5，3 mL 或 13 mL，产品编号 C315-3ML 或 -13ML

测定缓冲液浓缩液

需要用去离子水或蒸馏水稀释的5倍浓缩液。

试剂盒 K032-H1 或 -H5，28 mL 或 55 mL，产品编号 X065-28ML 或 -55ML

洗涤缓冲液浓缩液

需要用去离子水或蒸馏水稀释的20倍浓缩液。

试剂盒 K032-H1 或 -H5，30 mL 或 125 mL，产品编号 X007-30ML 或 -125ML

TMB底物

试剂盒 K032-H1 或 -H5，11 mL 或 55 mL，产品编号 X019-11ML 或 -55ML

停止溶液

1M的盐酸溶液。腐蚀性。

试剂盒 K032-H1 或 -H5，5 mL 或 25 mL，产品编号 X020-5ML 或 -25ML

板封口膜

试剂盒 K032-H1 或 -H5，1或5个，产品编号 X002-1EA

测定方案：

建议所有标准品和样本都进行双重测定，以使最终用户能够准确确定睾丸素浓度。

1. 使用背面的板布局表以帮助正确识别样本和标准品。

2. 确定要使用的孔数，并将未使用的孔放回带有干燥剂的铝箔袋中。密封Ziploc板袋并储存在4?C。

将标准品或样本沿板条列（A至H）逐滴加入孔中，以最大限度地利用条孔。

3. 向板中的孔中加入50 ?L的样本或标准品。

4. 向非特异性结合（NSB）孔中加入75 ?L的1X测定缓冲液。

5. 向最大结合（B0或零标准）孔中加入50 ?L的1X测定缓冲液。

6. 使用重复移液管向每个孔中加入25 ?L的DetectX?睾丸素缀合物。

7. 除了NSB孔外，使用重复移液管向每个孔中加入25 ?L的DetectX?睾丸素抗体。

8. 轻轻拍打板的侧面以确保试剂充分混合。用板封口膜覆盖板并在室温下摇动2小时。我们建议摇动速度在700-900转/分钟左右。如果不摇动板，结合的信号将大约低20%。

9. 抽吸板并在干净的吸收毛巾上轻拍以擦干。

10. 使用重复移液管向每个孔中加入100 ?L的TMB底物。

11. 在室温下孵育板30分钟，不要摇动。

12. 使用重复移液管向每个孔中加入50 ?L的停止溶液。

13. 在能够读取450纳米波长的板读数器中读取每个孔产生的光密度。

14. 使用板读数器内置的4PLC软件功能计算每个样本的睾丸素浓度。

注意：如果您只使用部分条孔板，在测定结束时丢弃已使用的孔，并保留板框架以用于剩余未使用的孔。

典型标准曲线：

始终运行自己的标准曲线来计算结果。请勿使用此数据