HiLyte 488荧光标记微管蛋白（猪脑来源），跨物种MAPs与药物研究通用

产品概述

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的HiLyte 488荧光标记微管蛋白（猪脑来源）（货号 TL488M）是一款绿色荧光标记的微管蛋白，适用于体外微管动力学研究、驱动蛋白（kinesin）运动实验以及微管相关蛋白（MAPs）与药物对微管动态影响的评估。该产品以冻干粉形式提供，标记效率与生物学活性均经过严格验证。

背景信息

微管蛋白（tubulin）由 α 与 β 两个密切相关的 55 kDa 蛋白组成的异二聚体构成。这两个蛋白由独立基因或小基因家族编码，其序列在真核生物界高度保守。因此，从猪脑组织中分离的微管蛋白与绝大多数真核来源的微管蛋白高度同源，这一特性带来了重要的技术优势：猪脑微管蛋白可用于检测来自多种不同物种的蛋白。

微管蛋白聚合后形成微管（microtubules, MTs）。聚合初期首先形成原纤维（protofilaments），微管由 13 条原纤维构成，直径约 25 nm。每微米微管长度包含约 1650 个异二聚体。微管是具有高度有序结构且具有内在极性的细胞骨架元件。

产品特性

TL488M 基于 Tubulin protein T240，通过 HiLyte 488 活化酯随机标记于微管蛋白表面赖氨酸残基上。

核心参数：

激发波长：502 nm，发射波长：527 nm（绿色光谱）

标记化学计量：每个微管蛋白异二聚体约 1–2 个染料分子

提供形式：冻干粉

纯度：>99%（经 12% SDS-PAGE 考马斯亮蓝染色扫描光密度测定）

应用领域

体外驱动蛋白运动实验的荧光微管底物

体外微管动力学研究

分析 MAPs 及药物对体外微管动力学的影响

生物学活性

TL488M 微管蛋白保留高生物学活性，经离心沉降实验（spin-down assay）确认，其体外聚合形成微管的比例超过 80%，性能与未标记微管蛋白相当。这表明荧光标记未显著影响微管蛋白的聚合能力，可放心用于对聚合动力学敏感的实验体系。

纯度验证

用于 TL488M 的蛋白经考马斯亮蓝染色 SDS-PAGE 分析，纯度确定为 >99%。为检测是否存在游离染料，取 25 ug 蛋白样品进行 SDS 电泳并在紫外光下拍照。若存在未掺入的染料，将在染料前沿（dye front）可见荧光信号。结果显示染料前沿未检测到荧光，表明标记反应中所有游离染料均已去除。

储存与复溶

冻干材料的推荐储存条件为 4°C、湿度低于 10%、避光保存，在此条件下可稳定保存 1 年。冻干蛋白也可在 -70°C 干燥条件下保存，稳定期同样为 1 年。

复溶时，先短暂离心使产品集中于管底（应可见浅橙色沉淀），用 2 ul General Tubulin Buffer（含 GTP，配方：80 mM PIPES、0.5 mM EGTA、2 mM MgCl₂、1 mM GTP，pH 6.9）重悬至 10 mg/ml。浓缩蛋白可在液氮中速冻后于 -70°C 保存（稳定 6 个月）。

关键注意事项： 微管蛋白必须使用液氮速冻，其他冷冻方法会导致活性显著降低。解冻时置于室温水浴中快速解冻约 1 分钟。避免反复冻融。

应用建议

该产品适用于需要荧光可视化微管的体外实验体系。其绿色光谱特性使其可与红色或远红荧光探针联合使用，实现多通道成像。在驱动蛋白运动实验中，HiLyte 488 标记的微管可提供明亮、稳定的荧光信号，便于追踪微管运动轨迹。建议根据具体实验需求优化微管蛋白浓度、聚合条件及成像参数，并在正式实验前进行预实验以确定最佳条件。

文献参考

1. Amos, LA. & Klug A. 1974. J.Cell Sci. 14: 523-530.

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