1,10邻菲罗啉：阻断JAMM型DUB，确保K63泛素链样本真实性

泛素化修饰是真核细胞内关键的翻译后调控机制，不同类型泛素链修饰介导完全不同的生理功能。K63连接多聚泛素链不参与蛋白酶体介导的蛋白降解，主要参与DNA损伤修复、天然免疫信号转导、蛋白复合物组装等生物学过程，是泛素化研究领域的重要研究对象。但在样本制备环节，内源去泛素化酶（DUB）极易降解K63泛素链，造成实验信号丢失，很多实验结果失真都源于裂解阶段的酶活失控，由艾美捷代理LifeSensors推出的1,10?邻菲罗啉（o?phenanthroline，货号：SI9649）正是解决该问题的核心试剂。

1,10?邻菲罗啉是对二价金属离子具备高结合能力的螯合剂，需要注意，该试剂并非去泛素化酶的广谱特异性抑制剂。JAMM家族异肽酶属于金属依赖型去泛素化酶，BRCC36、Poh1等典型成员的催化结构域需要结合活性中心Zn??才能发挥酶活，这类酶对K63连接泛素链具备很强的切割活性。依据文献报道，1,10?邻菲罗啉可以螯合酶活性位点的锌离子，高效抑制JAMM家族异肽酶活性，因此被广泛应用于细胞裂解液配制，用于富集携带K63连接多聚泛素链的蛋白。

常规DUB抑制剂如NEM仅能够抑制半胱氨酸类去泛素化酶，无法抑制金属离子依赖的JAMM家族DUB。在细胞裂解过程中，一旦JAMM家族酶保持活性，样本中原有的K63多聚泛素修饰会被快速剪切去除，直接造成蛋白富集失败，免疫印迹、质谱检测出现假阴性数据，导致研究者得出错误的实验结论。引用Cooper等人发表于《EMBO J》的经典研究，BRISC复合体结合的Brcc36以及蛋白酶体Poh1均为JAMM/MPN+复合体，负责特异性去除K63泛素链，这也奠定了1,10?邻菲罗啉在K63泛素样本制备中的应用基础。

本款1,10?邻菲罗啉一水合物（Cat. # SI9649）为预配制DMSO母液，浓度0.5?M，为100×储存液，单支规格0.5?mL，分子量198.21，产品纯度大于99%。预配制的DMSO溶液省去科研人员称量固体、溶解配制的操作，减少称量误差、试剂污染，提升实验效率。实验操作时将母液稀释得到1×工作浓度，建议在裂解液配制阶段就加入体系，第一时间抑制JAMM型异肽酶，保护样本内K63泛素链不被降解。产品需要?80℃条件储存，应当规避反复冻融，维持试剂螯合活性稳定，保障不同批次实验可重复性。

该产品仅限科研用途，不可用于人或动物的诊断与治疗。在K63泛素化蛋白免疫沉淀富集、泛素化质谱分析、JAMM家族酶活体外检测等实验中，1,10?邻菲罗啉是不可或缺的工具试剂。完善的样本前处理是获得可靠泛素组数据的前提，使用该试剂可有效抑制裂解过程中JAMM家族DUB的干扰，最大程度保留细胞内原始的K63泛素修饰状态，为解析泛素介导的信号通路机制提供坚实的实验保障。