文献解析—恩格列净抑制 SGLT-2 对低度炎症小鼠模型中的实验性动脉血栓形成没有影响

文献标题：SGLT-2 inhibition by empagliflozin has no effect on experimental arterial thrombosis in a murine model of low-grade inflammation

DOI：https://doi.org/10.1093/cvr/cvac126

研究背景：

研究背景是动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）与多种因素相关，包括年龄、糖尿病和肥胖等，是全球发病率和死亡率的主要原因。慢性低度炎症被认为是将肥胖诱导的代谢紊乱与胰岛素抵抗联系起来的关键介质，并在这些患者中ASCVD的高发病率中起着机制性作用。钠-葡萄糖共转运蛋白2（SGLT-2）主要在肾小管近曲小管中表达，控制葡萄糖重吸收回循环，因此SGLT-2的药物阻断可导致血糖降低，是一种高效的抗糖尿病疗法。大量实验证据表明，SGLT-2抑制剂除了控制血糖外，还可能通过调节动脉内皮的激活和改善内皮功能障碍来发挥“非靶向”效应，从而减缓动脉粥样硬化斑块的演变。恩格列净（empagliflozin）是SGLT-2抑制剂中对SGLT-2选择性最高的药物之一，已被证明可改善已确诊ASCVD的糖尿病患者的CV预后，可能涉及多种超出血糖控制的机制。然而，恩格列净对急性动脉血栓形成事件的影响尚不清楚，尤其是在持续低度炎症状态下，这通常发生在代谢紊乱状态中。因此，本研究旨在测试恩格列净是否会影响基线（BSL）条件下或低度炎症状态下的动脉血栓形成，这是ASCVD患者共有的系统环境。 

研究方法：

1. 动物实验：使用16周龄的C57BL/6小鼠进行实验，分为两组，一组接受恩格列净（25 mg/kg体重）的急性给药，另一组接受对照剂。其中一部分小鼠在诱导颈动脉血栓形成前，先用超低剂量的脂多糖（LPS；5 ng/kg体重）每两周处理一次，持续4周，以诱导慢性低度炎症状态。

2. 颈动脉血栓形成模型：通过光化学损伤颈动脉来诱导动脉血栓形成，使用多普勒血流探头监测血流变化，记录血流阻断时间。

3. 体外血小板聚集实验：从麻醉后的小鼠心脏穿刺取血，分离洗涤血小板，用胶原和凝血酶激活血小板，通过光透射聚集仪测定血小板聚集的最大聚集率、聚集速率和聚集滞后期。

4. 组织因子活性和表达测定：将颈动脉组织裂解，测定组织因子活性，并通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定组织因子在动脉组织中的表达。

5. 细胞培养实验：培养人主动脉内皮细胞（HAECs），用LPS预处理后，再用不同浓度的恩格列净处理，测定细胞裂解物中的组织因子活性和组织因子及PAI-1的表达。

6. 临床研究：将44名2型糖尿病合并ASCVD或高CV风险的患者随机分配到接受10 mg恩格列净或匹配安慰剂的每日治疗组，持续3个月，评估治疗前后的血浆TF和PAI-1水平。

研究内容：

研究恩格列净在基线条件和慢性低度炎症状态下对动脉血栓形成的影响。评估恩格列净对血小板数量、体积、激活状态以及对胶原和凝血酶诱导的血小板聚集的影响。同时，检测恩格列净对组织因子活性和表达、PAI-1表达以及血浆D-二聚体水平的影响。在2型糖尿病合并ASCVD或高CV风险的患者中，评估恩格列净治疗对血浆TF和PAI-1水平的影响。

研究结果：

1. 动物实验结果

动脉血栓形成：恩格列净对动脉血栓形成的影响与对照剂相当，无论是在基线条件下还是在慢性低度炎症状态下，两组间血流阻断时间的差异均在预设的等效性范围内。

血小板功能：恩格列净对血小板数量、体积没有影响，且对胶原和凝血酶诱导的血小板聚集反应（包括最大聚集率、聚集速率和聚集滞后期）也没有改变。

凝血因子：恩格列净对组织因子活性和表达、PAI-1表达以及血浆D-二聚体水平均无影响，提示恩格列净对凝血级联反应和纤溶活性没有影响。

2. 细胞实验结果

内皮细胞中的组织因子活性和PAI-1表达：恩格列净对LPS预处理的人主动脉内皮细胞中的组织因子活性和PAI-1表达没有影响。

3. 临床研究结果

血浆TF和PAI-1水平：在2型糖尿病合并ASCVD或高CV风险的患者中，恩格列净治疗3个月后，血浆TF和PAI-1水平没有变化。

血糖水平：恩格列净治疗显著降低了患者的血浆血糖水平。

在文献中，Mouse D-Dimer ELISA Kit（货号abx258705） 的主要应用是用于定量检测小鼠样本中的 D-Dimer 水平。D-Dimer 是纤维蛋白降解产物，其水平的变化可以反映体内纤溶系统的活性。因此，该试剂盒在研究中用于评估实验动物的纤溶活性和凝血状态，尤其是在涉及血栓形成和溶解的研究中。

Mouse D-Dimer ELISA Kit 的主要应用还包括：

血栓性疾病的研究：用于检测小鼠样本中的 D-Dimer 水平，以研究血栓形成和溶解的过程。

弥散性血管内凝血（DIC）的诊断：D-Dimer 是 DIC 的重要生物标志物，该试剂盒可用于辅助诊断 DIC。

纤溶系统疾病的研究：用于评估与纤溶系统相关的疾病状态，如妊娠综合症等。

溶栓治疗的监测：在溶栓治疗过程中，监测 D-Dimer 水平可以帮助评估治疗效果。

炎症相关研究：D-Dimer 水平的变化与炎症状态有关，该试剂盒可用于研究炎症对纤溶系统的影响。