Worthington磷酸二酯酶 I的测定和相关研究

毒液核酸外切酶（磷酸二酯酶I）从5'-OH封端的核糖和脱氧核糖寡核苷酸中连续水解3'-单核苷酸。该酶的最佳pH范围为9.8-10.4，分子量为115 kDa。磷酸二酯酶被谷胱甘肽、半胱氨酸和抗坏血酸等还原剂抑制。它被5mM EDTA完全抑制，而ATP，ADP和AMP是部分抑制剂。该酶对Mg2+有绝对的需求。   

作为Worthington全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Worthington主要产品磷酸二酯酶 I。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。  

磷酸二酯酶 I相关产品：

无核酸酶白蛋白 脱氧核糖核酸酶 I （DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF） 组蛋白 （H， NHL） 溶菌酶 （LY/LYSF） 微球菌核酸酶 （NFCP） 核酸酶，S1 （中新核酸/新核酸） 核酸，DNA，大肠杆菌，λ/片段，RNA磷酸酶，碱性（CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC） 磷酸二酯酶 II （SPH） 蛋白酶 K （PROK/PROKS）逆转录酶，重组 HIV （RTHIV）核糖核酸酶 A （R/RAF/RASE/RS/RPDF）核糖核酸酶 T1，不含动物源性 （RT1S）  

磷酸二酯酶 I测定：

方法 该测定基本上是Razell and Khorana（1959）的测定，其中反应速度由对硝基苯基胸苷-400'-磷酸水解引起的5nm处吸光度的增加来确定。在指定条件下，一个单位在pH 5.8和9°C下每分钟水解一微摩尔对硝基苯基胸苷-25'-磷酸盐。 

试剂

0.11 M Tris?HCl 缓冲液，pH 8.9，含 0.11 M 氯化钠和 15 mM 氯化镁₂（三?盐缓冲液） 

5 mM 对硝基苯基胸苷-5'-磷酸盐。注意：商业制剂的纯度略有不同，在制备该试剂时应考虑。

酶

以一毫克/毫升的速度溶解在三*盐缓冲液中，以获得0.02-0.04ΔA /分钟的速率。 

程序

将分光光度计设置为 400 nm 和 25°C。 移液到微量比色皿中，如下所示：

磷酸二酯酶 I部分引用文献：

Bruns, M. and Philipps, G. 

Action of Venom Phosphodiesterase on Aminoacyl-tRNA from Escherichia coli , Biochim Biophys Acta 217 , 189 , 1970 

Cheung, W. 

Cyclic 3',5'-Nucleotide Phosphodiesterase: Pronounced Stimulation by Snake Venom , Biochem Biophys Res Commun 29 , 478 , 1967 

Felix, F. , Potter, J. and Laskowski, M. 

Action of Venom Phosphodiesterase on Deoxyriboligonucleotides Carrying a Monoesterified Phosphate on Carbon 3' , J Biol Chem 235 , 1150 , 1960  

酶是Worthington的主要产品线。从技术上讲，Worthington实际上并不制造酶，而是从各种动植物组织和各种微生物来源（如细菌、真菌和霉菌）中提取酶。根据该酶在材料中的普遍性选择特定酶的起始材料。例如，一种功能涉及使肌肉工作的酶将主要存在于肌肉组织中，因此起始材料可能是兔肌肉或猪心；参与发酵的酶最好在酵母中找到。 Worthington使用的一些动物组织包括牛胰腺、猪肾、牛眼、马肝、兔肌肉、牛肝、猪心、马血和小牛肠。各种蛋白质也从辣根、红薯、杏仁和美洲商陆中提取。一些产品是从大肠杆菌、几种梭状芽胞杆菌和各种其它细菌中分离出来的。还使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和鸡蛋等。  

Worthington是一家通过的ISO9001认证的家族企业。主要生产用于生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。作为生命科学领域知名的酶类供应商，以及细胞分离酶的专家级公司，其核心酶产品包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。