如何应对植物组培过程中的污染问题？PPM植物组培抗菌剂

植物的组织培养广义又叫离体培养，是20世纪初发展起来的一门新兴技术。植物组织培养是一种在无菌条件下，将植物的组织或细胞培养在人工培养基上进行生长和繁殖的技术。它涉及将植物的组织（如叶片、茎、根、胚等）或细胞分离出来，并在含有营养物质、激素和其他必要成分的培养基中进行培养。植物组织培养可以用于多种目的，包括：

1. 植物繁殖：通过植物组织培养，可以实现植物的无性繁殖，如愈伤组织培养、离体芽培养和胚培养等。

2. 基因转化：利用植物组织培养技术，可以将外源基因导入植物细胞中，实现植物的基因转化，以获得具有特定性状的转基因植物。

3. 病毒检测和病毒清除：通过植物组织培养，可以检测植物中存在的病毒，并进行病毒清除，以保证植物的健康和繁殖性。

4. 植物生理研究：植物组织培养可以用于研究植物的生理过程、激素调控、生长发育和代谢途径等。

植物组织培养技术在植物育种、研究和工业生产等领域具有广泛的应用。它为研究植物生物学、改良植物性状和保护植物资源提供了有力的工具。

在植物组织培养中，污染指的是在培养过程中出现的非预期的微生物、真菌、细菌或其他外来物质的存在。这些污染物可能来自环境、操作人员、培养基或培养器具等。植物组织培养的无菌条件是非常重要的，因为任何污染都可能对培养物的生长和发育产生不利影响。面对植物组培污染问题，我们通常采取在培养基中加入适量的抗生素（如青霉素、链霉素、氯霉素等）来抑菌。但是抗生素一般不稳定，遇酸、碱或加热都易分解而失去活性。而且单一抗生素抑菌容易产生抗药性，一旦停止使用，污染率就会显著上升。同时，高浓度的抗生素还会影响植物的生长。

为解决上述问题，我们推荐专业植物组培高效广谱性抗菌剂PPM，它可以有效预防和清除由于空气、灭菌不彻底、交叉污染、外植体消毒等各种原因导致的植物组培苗的真菌、细菌、内生菌和农杆菌污染。可以加入培养基高温灭菌；在合理使用剂量下，不会对植物的生长产生任何影响。

作为Plant Cell Technology（PCT）在中国区域的代理商，艾美捷科技将为中国客户提供全面的Plant Cell Technology（PCT）产品以及客户订制化服务。欢迎大家随时联系我们。

Plant Preservative Mixture (PPM) 使用方法

一．常规污染预防用量

一般推荐使用浓度为0.05%-0.2%（1L培养基中加入0.5-0.75ml PPM）；愈伤增殖， 器官形成，胚性组织发育等使用浓度为0.05%-0.075%。

二．植物内生菌污染处理

1. 种子：PPM不推荐用于直接处理含有大量的细菌或真菌孢子的种子灭菌；对于种子离体萌发，建议先采用传统方法消毒，然后置于含 2-3%PPM的全培养基础盐溶液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加Tween20和调节pH，处理完成以后直接插入含有 PPM(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培养基里进行培养。

2. 外植体：以 1cm 外植体为例，将外植体置于含 4-5%PPM的全培养基础盐溶液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加 Tween20和调节pH，处理完成以后直接插入含有PPM(草本植物 0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培养基里进行培养。

3. 块茎，球茎和鳞状物的观赏植物样本：将其整体放入消毒剂中搅拌消毒处理以后， 用水冲洗干净，将材料切成薄片，置于含 4-5%PPM的全培养基础盐培养液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加Tween20 和调节pH，处理完成以后无需冲洗直接插入含有 0.1-0.2%的PPM的培养基里进行培养。

三．经过处理效果不理想的样本

如果厚的外植体、污染严重的植株、种子等样本经过以上处理仍得不到理想效果，可尝试以下操作：

1. 将材料浸泡在水中持续搅拌处理(松软组织搅拌1小时，硬实组织搅拌2小时)。

2. 将材料在含50%的PPM全培养基础盐溶液中搅拌处理5-10分钟，此过程千万不能添加 Tween20 和调节pH。

3. 无需冲洗，将处理过的材料直接加入到培养基中即可。对于真菌污染，可在培养基中加入适当浓度的PPM。对于真菌细菌混合性污染，建议在培养的第一个月的培养基中加入0.05%-0.2%的PPM。

四．严重污染材料污染去除与抢救（重污染不超过一周）

1. 将污染的材料至于流水中用软刷刷洗，然后置于含50% PPM的无菌水溶液中搅5-15分钟；对于细菌或者混合性污染，建议使用 100% PPM与 0.6g/L 的柠檬酸无菌水溶液按 1：1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液处理。

2. 处理后的材料无需清洗，直接插入含0.05%-0.25的PPM的培养基中培养至少一个月以上，其中前10天需要弱光培养。

五．农杆菌的去除

共培养以后，将样本用无菌水清洗，然后将样本浸没在 100% PPM（补充4X的培养基盐溶液）中处理2分钟，取出后用无菌纸吸干后并置于常用抗性培养基中培养，3 周后，更换到只含有0.05%-0.075% PPM(无常用抗生素)的培养基中培养。

注意事项：

1. 在所有 PPM消毒处理外植体的过程中，尽量保证容器的体积足够大，并使外植体材料所有面积与含PPM的处理溶液充分接触，以保证消毒效果；

2. 如果外植体出现高度氧化现象，不要扔弃，大约50%的外植体在 4-6 周内即可恢复；

3. 50% PPM 的处理溶液可以重复使用但是不推荐，因为使用次数和效果受外植体的体积与接种密度的影响。将50% PPM的处理溶液保存在4?C可适当延长其活性，一般可使用不超过10次。如果必要，建议配制2份50% PPM溶液，一份用于外植体消毒内生菌污染，另一份用于消除“培养过程中”的轻度污染材料抢救，第二份溶液在每次处理过后需要用 0.2mm滤器过滤；

4. 如果50%PPM溶液处理效果不理想，可采用100%PPM溶液进行处理，处理方法相同，但使用次数不得超过10次。

来自Plant Cell Technology,Inc(PCT)官网，更多数据请在官网搜索。

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美国Plant Cell Technology（PCT）公司为商业及研究用植物组织培养实验室和植物种植者开发和生产了旗舰产品PPM (Plant Preservative Mixture)，它是一种广谱抗微生物剂，可以杀死细菌和真菌细胞，防止真菌孢子的萌发，并在较高浓度下能消除内源性污染的外植体。PPM能有效地抑制植物细胞和植物组织培养中的通过空气、水、人传播的微生物污染及内源性污染，而不会影响体外种子发芽、愈伤组织增殖和愈伤组织的再生。并且，PPM具有热稳定性，可以和培养基一起灭菌，同时比常用抗生素价格更低廉，可以作为植物组织培养基的标准成分。

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