N6 - 甲基腺苷(m6A)是真核生物中 RNA 分子上最常见且最丰富的修饰。在多细胞真核生物中也发现了 DNA 上的 m6A,包括秀丽隐杆线虫和黑腹果蝇,此外在高等真核生物中也发现了,包括植物、小鼠和人类细胞。m6A 在调控 DNA 复制、转座、转录和细胞防御中起着至关重要的作用。在人类中,DNA 上的 m6A 修饰很可能是由甲基转移酶复合体 METTL3 催化生成的,并且可被 α - 酮戊二酸(α - KG)和 Fe2 + 依赖的双加氧酶(如 ALKBH5 和 TET 类似酶)去除。研究表明,METTL3 和 α - KG/Fe2 + 依赖的双加氧酶在许多生物学过程中发挥着重要作用,从发育和代谢到生育能力都有涉及。DNA 上动态且可逆的化学 m6A 修饰也可能作为一种具有深远生物学意义的新型表观遗传标记。在人类癌细胞和组织中,m6A 修饰的下调首次被描述,与它们的正常对照相比。m6A 被发现是癌症中调控最多的 DNA 修饰。除了在癌细胞中的调控外,与含有相当低量 DNA m6A(< 0.001%)的原代细胞 / 组织相比,在体外培养的人类细胞中发现了 m6A 修饰的百倍增加(0.03% - 0.22%)。因此,识别 DNA 上的 m6A DNA 甲基化水平和分布可以推进对基因组水平上生物学过程表观遗传调控的理解,并为进一步改善疾病诊断和治疗提供有用的信息。
MethylFlash? m6A DNA 甲基化 ELISA 试剂盒(比色法)是一套经过优化的缓冲液和试剂,用于比色法定量检测 DNA 中的 N6 - 甲基腺苷(m6A 或 6mA)。该试剂盒适用于直接检测从任何物种(如哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒)中分离的 DNA 的 m6A DNA 甲基化状态。
艾美捷MethyFlash m6A DNA甲基化ELISA试剂盒(比色法)(#P-9010-48)优势与特点:
1、比色法检测,操作步骤简便,方便快捷。整个操作流程可在 3 小时 45 分钟内完成。
2、高灵敏度,检测限可低至 5 pg 的 m6A。
3、独特的结合溶液可使长度大于 100 个核苷酸的 DNA 紧密结合到孔中,从而能够对完整 DNA 或片段化 DNA(如 ChIPed DNA)中的 m6A 进行定量。
4、优化的抗体和增强溶液对 m6A 具有高特异性,在样本 DNA 的指定浓度范围内,对未甲基化的腺苷无交叉反应。
5、包含通用的正负对照,适用于定量任何物种的 m6A。
6、条带式微孔板格式使检测既适用于手动操作,也适用于高通量分析。
7、简单、可靠且一致的检测条件。
原理与操作流程:
该试剂盒包含用于定量检测 DNA 中 m6A 的所有试剂。在该检测中,使用 DNA 高结合溶液将 DNA 结合到条带孔中。利用捕获和检测抗体检测 m6A。增强检测信号,然后通过在微孔板分光光度计中读取吸光度来比色法定量。m6A 的含量与测得的 OD 强度成正比。
左图:将不同浓度的 m6A 标准对照品加入到检测孔中,然后使用 EpiQuik? m6A DNA 甲基化 ELISA 试剂盒(比色法)进行测量。
右图:使用 MethylFlash? m6A DNA 甲基化 ELISA 试剂盒(比色法)定量检测各种人类 DNA 样本中的 m6A 含量。
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