CRISPR(成簇规律间隔短回文重复序列)和 Cas9(CRISPR 相关系统或 CRISPR 相关蛋白 9 核酸酶)是在细菌中发现的一种防御机制,用于抵御外来 DNA。这一系统的发现已被证明是基因编辑和基因组工程应用中靶向和修改遗传序列的无价之宝。该系统被称为 CRISPR/Cas9,通过将 RNA 引导的 Cas9 核酸酶和适当的引导 RNA(gRNA)导入细胞,实现对目标基因组位点的序列特异性切割。此外,紧随特异性序列之后的原间隔相邻基序(PAM)序列对于 Cas9 核酸酶的成功结合是必需的。监测 Cas9 编辑蛋白的水平或在转染细胞中追踪 Cas9 编辑蛋白是重要且关键的,因为这可以告知转染效率并优化细胞群体中的编辑过程。已有报道表明,金黄色葡萄球菌 Cas9(SaCas9)介导的基因组编辑已在人类细胞和拟南芥中实现。由于 SaCas9(1053 个氨基酸)比化脓性链球菌 Cas9(SpCas9)(1368 个氨基酸)更小,SaCas9 在递送和表达 Cas9 蛋白方面可能具有显著优势,尤其是在使用病毒载体时。
目前,WB是测量 SaCas9 蛋白表达或含量的最突出的检测技术。然而,这种传统方法需要电泳和转膜过程,使得检测过程不便、耗时且通量低。EpiQuik? CRISPR/SaCas9(金黄色葡萄球菌)检测试剂盒(比色法)通过采用独特的方法来测量 SaCas9 蛋白的含量,解决了这些问题。
艾美捷EpiQuik CRISPR/SaCas9(S. aureus)检测ELISA试剂盒(比色法)(#P-4062-48)优势与特点:
1、快速高效的操作流程,可在 3 小时内完成。
2、创新的比色法高通量检测,无需电泳即可定量测量 Cas9 蛋白含量,特别适合筛选 Cas9 转染克隆。
3、高灵敏度和特异性。检测限低至 0.1 ng/孔,检测范围为 0.5-20 ng/孔,适用于全细胞提取物的指定含量范围。仅识别 SaCas9(金黄色葡萄球菌)。
4、方便地包含了用于定量 SaCas9 含量的对照。
5、条带式微孔板格式使检测既适用于手动操作,也适用于高通量分析。
6、简单、可靠且一致的检测条件。
图:将不同浓度的 SaCas9 蛋白加入到 1 ?g 的 K562 细胞提取物中。使用 EpiQuik? CRISPR/SaCas9(金黄色葡萄球菌)检测试剂盒(比色法)测量了 SaCas9 蛋白的含量。
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