Epigenase? APOBEC3A活性/抑制检测试剂盒是一种完整的优化缓冲液和试剂套装,用于测量人类及其他哺乳动物细胞提取物或纯化的APOBEC3A酶的活性/抑制。该试剂盒可用于多种形式的样本,包括但不限于培养细胞、新鲜和冷冻组织。
艾美捷Epigentek-表观基因酶APOBEC 3A活性/抑制测定试剂盒(#P-3142-48)具有以下优势:
比色法检测,操作步骤简单,可在5小时内完成。
创新的试剂盒组成使得背景信号极低,使得检测过程简单、准确、可靠且一致。
可使用细胞/组织提取物以及纯化的APOBEC3A酶来检测体内和体外的APOBEC3A抑制剂效果。
新颖的检测原理实现了高灵敏度,纯化APOBEC3A酶的检测下限低至10纳克。
试剂盒包含检测标准品,用于定量APOBEC3A的特异性活性。
采用条带式微孔板格式,适用于手动或高通量分析。
原理与操作:
该试剂盒专为检测APOBEC3A活性/抑制而设计。在使用该试剂盒的检测中,独特的5mC(5-甲基胞嘧啶)底物被稳定地包被在条带孔中。活性的APOBEC3A能够结合并催化底物中的5mC转化为T(胸腺嘧啶)。未转化的5mC可以通过高亲和力的5mC抗体识别,并通过增强液增强免疫信号。未转化的5mC的比例或量与酶活性成反比,可通过类似ELISA的比色反应进行定量。
左图:使用Epigenase? APOBEC3A活性/抑制检测试剂盒检测重组APOBEC3A的活性。不同浓度的重组人APOBEC3A酶被加入检测体系中。吸光度(OD)与APOBEC3A酶活性成反比。右图:将图4中显示的原始OD数据转换后的结果。
起始材料 :
输入材料可以是细胞提取物或纯化的APOBEC3A酶。每次检测所需的细胞提取物量为2微克至30微克,最佳范围为15-20微克。纯化酶的用量为10纳克至1微克,最佳范围为50纳克至200纳克,具体取决于酶的类型、纯度和催化活性。
运输与储存:
该试剂盒分两部分运输:第一部分在常温下运输,第二部分在4℃下使用冷冻冰袋运输。收到试剂盒后:(1)将A3AS、AAS、DA和ES置于-20℃避光保存;(2)将WB、A3AB、CA、DS和8孔检测条置于4℃避光保存;(3)将剩余组分(BS和SS)在室温下避光保存。
注意:使用前检查10倍洗涤缓冲液(WB)是否含有盐沉淀。如有沉淀,可在室温或37℃下加热并摇晃缓冲液,直至盐重新溶解。
如果储存得当,试剂盒的所有组分自发货之日起有效期为6个月。
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