EpiQuik DNMT活性/抑制检测试剂盒，灵敏度提升10倍，实现低丰度样本精准定量

一、背景介绍

DNA 甲基化是指在 DNA 甲基转移酶（DNMTs）的催化下，将甲基基团共价结合到胞嘧啶环第 5 位碳原子上，生成 5-甲基胞嘧啶的过程。这些甲基基团伸入 DNA 大沟，抑制基因转录。在人类基因组 DNA 中，约 1.5% 的胞嘧啶为 5-甲基胞嘧啶，主要分布于 CpG 位点。CpG 位点密集分布于长度为 0.3 至 2 kb 的 DNA 区域，称为 CpG 岛，通常位于基因启动子区或附近。基因组中大部分 CpG 位点处于高度甲基化状态，而生殖细胞及正常体细胞启动子区的 CpG 岛则保持非甲基化，从而允许基因表达。当基因启动子区 CpG 岛发生甲基化时，基因表达受到抑制，其机制包括直接阻碍特定转录因子的结合，以及间接招募甲基-CpG 结合蛋白及其相关的抑制性染色质重塑活性。此外，DNA 甲基化还参与基因组印记和染色质结构域的形成。

DNA 甲基化由 DNMT 家族酶催化完成。DNMT1 主要负责维持已建立的甲基化模式，而 DNMT3A 和 DNMT3B 则介导新的或从头甲基化模式的建立。DNMT3L 是 DNA 甲基转移酶的催化非活性调节因子，对 DNMT3A 和 DNMT3B 的功能至关重要。在癌细胞等病变细胞中，DNMT1 单独不足以维持异常基因高甲基化，DNMT1 与 DNMT3B 可能协同完成该功能。局部染色质结构也参与 DNA 甲基化的调控。

二、产品概述

由艾美捷代理Epigentek推出的EpiQuik DNMT 活性/抑制检测试剂盒（比色法）（货号：P-3139）是一套完整的优化缓冲液和试剂组合，可用于利用核提取物或纯化酶快速、简便地检测 DNA 甲基转移酶活性或抑制作用。适用物种广泛，包括哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒，样本形式包括但不限于培养细胞、新鲜及冷冻组织。该试剂盒即用型设计，提供所有必需组分，无需放射性物质或特殊设备即可完成实验。

核提取物可使用自有方法制备，也可选用 EpiGentek 提供的核提取试剂盒以获得最佳结果。核提取物可立即使用或于 –80°C 保存备用。纯化酶可为重组蛋白或从细胞/组织中分离的活性 DNMTs。

该试剂盒在前代产品基础上进一步优化，简化了操作步骤，显著缩短了检测时间，并提高了检测灵敏度。

三、产品优势与特点

快速：减少操作步骤，整个流程仅需 2 小时 10 分钟。

灵敏：检测限低至 0.2 ng 纯化酶，灵敏度较前代产品提高十倍。

便捷：即用型试剂盒，包含所有必需组分，无需放射性物质或特殊设备。

稳健：优化的试剂组成提供更宽的信号窗口，减少重复间差异。

灵活：96 孔条板格式，适用于手动或高通量分析。

四、原理与操作流程

本试剂盒包含检测 DNMT 活性或抑制所需的全部试剂。实验中，通用 DNMT 底物被稳定包被于微孔板孔中。DNMT 酶将甲基基团从 AdoMet 转移至胞嘧啶，使 DNA 底物甲基化，甲基化 DNA 可被抗 5-甲基胞嘧啶抗体识别。甲基化 DNA 的量与酶活性成正比，可通过类似 ELISA 的反应在 450 nm 波长下读取吸光度进行定量。DNMT 酶活性与所测光密度强度成正比。

五、起始材料

每次检测所需核提取物用量为 0.5 ?g 至 20 ?g，最佳范围为 5 ug 至 10 ug。纯化酶用量为 0.2 ng 至 100 ng，具体取决于酶的纯度和催化活性。

六、文献参考

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