EpiQuik循环乙酰基组蛋白 H3K27 ELISA试剂盒（比色法）使用说明&注意事项

表观遗传基因失活的主要机制是DNA甲基转移酶引起的基因组DNA中CpG岛的甲基化。组蛋白乙酰转移酶（HATs）和去乙酰化酶（HDACs）通过染色质依赖的转录抑制或激活来控制或调节DNA甲基化。HATs将乙酰基团从乙酰辅酶A转移到组蛋白的赖氨酸残基上。P300是主要的HAT，它催化哺乳动物细胞中组蛋白H3在赖氨酸27（H3K27）上的乙酰化。HDACs和SIRTs是使H3K27去乙酰化的组蛋白去乙酰化酶。H3K27ac一直被视为转录活性基因的标志性标记，它仅存在于启动子下游的5'区域。H3K27ac的水平也可以通过抑制或激活HATs或HDAC/SIRTs而改变。在血浆或血清中检测到的循环H3K27ac已被证明是许多不同疾病或病理变化（如癌症进展）的标志物。因此，检测循环H3K27ac能够为更好地理解基因激活和沉默的表观遗传调控、与组蛋白修饰相关的病理过程、疾病相关生物标志物的筛选以及开发针对组蛋白修饰的药物提供有用信息。

EpiQuik?循环乙酰化组蛋白H3K27 ELISA试剂盒（比色法）是一种方便的工具包，允许实验者从生物液体样本（如人类、小鼠或大鼠的血浆和血清）中特异性地检测循环乙酰化组蛋白H3K27（H3K27ac）。  

艾美捷EpiQuik循环乙酰基组蛋白 H3K27 ELISA试剂盒（比色法）（#P-3136-48）优势与特点：

1、快速高效的实验流程，可在2.5小时内完成。

2、高灵敏度和特异性。检测限低至0.5 ng/孔，在血浆/血清中指示量范围内的动态范围为1-20 ng/孔。仅识别H3K27ac，与未修饰的H3或其他同一赖氨酸位点的修饰物无交叉反应。

3、方便地包含对照用于H3K27ac的定量。

4、条带微孔板格式使实验灵活：可手动或高通量操作。

5、简单、可靠且一致的实验条件。

原理与操作流程：

本试剂盒用于测量血浆或血清中的总H3K27ac。在使用该试剂盒的实验中，血浆/血清样本中乙酰化于K27的组蛋白H3蛋白被涂有抗H3K27ac抗体的条带孔捕获。捕获的H3K27ac蛋白随后可被检测抗体识别，并通过比色显色试剂进行显色。H3K27ac的比例与吸光强度成正比。通过与标准对照比较，可以定量H3K27ac的绝对量。

起始材料

起始材料应为血浆或血清。每次实验所需的血浆或血清量为10至40 ?l，最佳量为30 ?l。

图：从HL-60细胞中使用EpiQuik?总组蛋白提取试剂盒（产品编号：OP0006）制备组蛋白提取物，并将其以不同浓度加入牛血浆中。随后利用EpiQuik?循环乙酰化组蛋白H3K27 ELISA试剂盒（比色法）测定了H3K27ac的含量。

使用说明：

EpiQuik?循环乙酰化组蛋白H3K27 ELISA试剂盒（比色法）适用于从人类、小鼠或大鼠的血浆和血清等生物液体样本中特异性地测量循环乙酰化组蛋白H3K27（H3K27ac）。每次实验所需的血浆或血清量为10至40 ?l，最佳量为30 ?l。由于不同个体以及正常和疾病状态下H3K27ac的含量可能不同，建议进行重复样本检测以确保信号的可靠性。鉴于血浆或血清中组蛋白H3的含量可能不同，我们强烈建议同时进行总组蛋白H3的平行测量，以提高H3K27ac定量的准确性。EpigenTek提供EpiQuik?循环总组蛋白H3定量试剂盒（比色法）（产品编号：P3091），可用于此目的。

注意事项：

为了避免交叉污染，请小心将样本或溶液加入条带孔中。使用防气溶胶的移液枪头，并在每次液体转移之间更换移液枪头。在整个实验过程中佩戴手套。如果手套与样本接触，请立即更换手套。

运输与储存：

该试剂盒分两部分运输：第一部分在常温下运输，第二部分在4℃的冷冻冰袋中运输。收到试剂盒后：（1）将DAb和标准对照置于–20℃，避免光照；（2）将WB、HAB、DS、8孔检测条和对照检测条置于4℃，避免光照；（3）将剩余组分（SS和粘性覆盖膜）置于室温，避免光照。当储存条件合适时，试剂盒的所有组分自发货之日起稳定期为6个月。

注意事项：

（1）使用前检查WB（10倍洗液）中是否含有盐沉淀。如果有，请在室温或37℃下加热并摇晃缓冲液，直至盐重新溶解；（2）检查DS（显色液）中是否呈现蓝色，这表明溶液受到污染，不应使用。为了避免污染，在将DS加入检测孔之前，先将所需的DS量转移到一个次级容器（试管或小瓶）中。