比色法MethylFlash全局DNA甲基化（5-mC）ELISA简易试剂盒，2小时完成全局甲基化定量

产品概述

由艾美捷代理Epigentek推出的MethylFlash Global DNA Methylation (5-mC) ELISA Easy Kit（货号：P-1030）是一套完整的优化缓冲液与试剂组合，专为通过简化的“一步法”类ELISA反应，对全局DNA甲基化状态进行比色定量检测而设计。该试剂盒能够特异性测量5-甲基胞嘧啶（5-mC）的总水平，使全局DNA甲基化的直接测量比其他技术（如LUMA、LINE-1、Alu或LTR-based assays）更加快速便捷。作为EpigenTek专利全局DNA甲基化技术的第四代产品，它在速度、简便性、灵敏度和重复性方面对前代MethylFlash试剂盒进行了进一步改进。

该试剂盒还可与MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation (5-hmC) ELISA Easy Kit（比色法）配对使用，用于同时定量甲基化DNA和羟甲基化DNA。

背景知识

DNA甲基化是由DNA甲基转移酶催化，在胞嘧啶环的第5个碳原子上共价添加一个甲基基团，生成5-甲基胞嘧啶（5-mC）的过程。在体细胞中，5-mC几乎仅存在于对称配对的CpG二核苷酸甲基化环境中；而在胚胎干细胞（ES细胞）中，也可观察到大量非CpG环境中的5-mC。5-mC的水平在动物基因组中差异较大，从某些昆虫中无法检测到的水平，到脊椎动物中约占总DNA的2%不等。植物中5-mC水平通常占总DNA的0.5%–2%，在某些其他物种中可高达8%。

5-mC作为表型和基因表达中重要的表观遗传修饰，其生物学重要性已被广泛认可。例如，全局5-mC含量下降（DNA低甲基化）可能由多种环境影响导致的甲基缺乏引起，并已被提出作为癌症等多种生物过程中的分子标志物。研究充分证明，全局DNA甲基化水平降低是癌症最重要的特征之一。此外，在人类和小鼠组织以及胚胎干细胞中，还检测到了一些新型修饰核苷酸，如5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）、5-甲酰基胞嘧啶（5-fC）和5-羧基胞嘧啶（5-caC）。在哺乳动物中，这些修饰核苷酸可由TET家族酶介导的5-甲基胞嘧啶迭代氧化反应生成。

产品优势与特点

快速：步骤精简，整个操作流程仅需2小时。

稳健：改进的试剂盒组分使检测具有更大的“信号窗口”，减少重复间变异。

便捷：固有低背景噪音，无需DNA变性及板封闭步骤。

灵敏：检测限可低至100 ng输入DNA中的0.05%甲基化DNA。

特异：对5-mC具有高特异性，在样本DNA指定浓度范围内，与未甲基化胞嘧啶及羟甲基胞嘧啶均无交叉反应。

通用：包含阳性和阴性对照，可检测任何物种的单链或双链输入DNA的甲基化水平。

准确：优化的阳性对照可按百分比比例分级，使检测更准确，且与HPLC-MS分析高度可比。

灵活：条孔微孔板格式，适用于手动或高通量分析。

原理与操作流程

本试剂盒包含全局DNA甲基化定量所需的全部试剂。在检测中，DNA结合到经特殊处理、具有高DNA亲和力的条孔中。DNA的甲基化部分通过捕获抗体和检测抗体进行识别，随后通过微孔板分光光度计读取吸光度进行比色定量。甲基化DNA的百分比与测得的OD强度成正比。

起始材料要求

输入DNA应相对纯净，260/280比值大于1.6，可用水或TE缓冲液稀释。每个反应的DNA用量范围为5 ng至200 ng。推荐使用100 ng DNA，此为获得最佳结果的优化输入量。DNA可从任何物种（如哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒）中分离，形式包括但不限于培养细胞、新鲜和冷冻组织、石蜡包埋组织、血浆/血清样本及体液样本。大小在200 bps至全长之间的单链DNA和双链DNA均适用。

应用建议

该试剂盒适用于需要快速、准确评估全局DNA甲基化水平的研究场景，尤其适合癌症相关研究、表观遗传学药物筛选、干细胞研究以及环境暴露评估等领域。其一步法操作和条孔板格式使其既适用于小规模手动实验，也便于高通量自动化分析。建议在实验设计中同时使用阳性和阴性对照，以确保结果的可靠性和可比性。对于需要同时评估DNA羟甲基化水平的研究，可搭配5-hmC ELISA Easy Kit使用，从而获得更全面的表观遗传修饰信息。