组蛋白作为染色质核心结构蛋白,其翻译后修饰(如甲基化、乙酰化)直接调控基因表达,是表观遗传学研究的基础。以下场景中,高质量的组蛋白提取至关重要:
1. 表观遗传修饰分析:组蛋白乙酰化、甲基化等PTMs是表观遗传调控的核心标志物,与癌症、神经退行性疾病密切相关。通过定量H3K4me3、H3K27ac等修饰水平,用于疾病生物标志物筛选 。
2. 染色质免疫沉淀(ChIP):组蛋白提取是ChIP实验的前提步骤,用于研究转录因子与DNA互作机制 。
3. Western Blot高通量检测:针对特定PTMs(如H3K9me3)的抗体验证需高纯度组蛋白,适用于药物靶点筛选 。
传统组蛋白提取方法的痛点与局限
传统酸提取法(HCl/H2SO4)虽广泛使用,但存在显著缺陷:
1. 操作复杂且耗时:需经细胞核分离→酸溶解→TCA沉淀→多次洗涤干燥,全程≥6小时。
2. 样本损失严重:每步离心损失10–30%组蛋白,对珍贵样本(如原代细胞)尤为致命。
3. 修饰降解风险:强酸环境导致H3尾部截断,影响PTMs检测准确性;酸不稳定修饰(如磷酸化)易被破坏。
4. 兼容性差:高盐残留干扰质谱分析,限制下游应用。
选择Epigentek总组蛋白提取试剂盒(货号OP-0006)的三大优势
1. 高效温和的提取流程:
·采用预优化裂解缓冲体系,30分钟完成裂解→离心→组蛋白收集,较传统方法提速80% 。
·温和酸性环境保留PTMs完整性,避免H3降解 。
2. 卓越的产率与纯度
·低样本量兼容性:仅需10^5细胞即可操作,适用于穿刺活检等微量样本 。
·纯度验证:提取物经SDS-PAGE/Coomassie染色及WB(抗H3抗体)验证,非组蛋白残留≤5% 。
3. 下游分析广泛兼容
·质谱友好型:低盐缓冲体系直接兼容Bottom-up/MS,支持H3K27ac、H3K9me3等修饰定量 。
·适用多种检测:直接用于WB、ELISA及ChIP,无需额外纯化 。
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