铁测定试剂盒，测定细胞或组织裂解液样本中的亚铁离子

铁（分子量55.845克/摩尔）是一种在所有已知生物体的各种代谢过程中都必不可少的元素。其中最重要的过程包括电子传递、氧气运输和DNA合成。铁最常见的存在形式是铁-硫中心和各种血红素。与其他大多数通过吸收和排泄来调节水平的离子不同，体内的铁水平仅通过吸收过程来控制。AkrivisBio的铁检测试剂盒是一种简单直接的方法，用于测定样本中的亚铁离子（Fe??）。在检测中，样本中存在的铁化合物可以选择性地被还原为亚铁形式（Fe??），然后与FereneS反应生成一个在593纳米处具有最大吸收峰的稳定色素。通过添加一种添加剂来防止铜的干扰。该检测适用于多种样本中铁含量在0到10纳摩尔范围内的测定。

艾美捷铁测定试剂盒：

货号：MA-0103

规格：100孔

样本类型：细胞或组织裂解液、血清

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法，检测波长593纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法检测，用于测量样本中铁含量（0-10纳摩尔）。

检测范围：0-10纳摩尔

储存条件：+4°C

运输条件：凝胶冷藏包

铁测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0103A

-铁还原剂：0.7毫升，绿色，货号MA-0103B

-FereneS：12毫升，货号NMMA-0103C

-Fe??标准品（100mM）：0.1毫升，黄色，货号MA-0103D

铁测定试剂盒检测原理：

1.铁化合物被溶解，使所有Fe??和Fe??都可用。Cu??被螯合以去除干扰。

2.可选择性地添加还原剂将Fe??转化为Fe??（总铁）或省略（仅还原铁，Fe??）。

3.添加FereneS形成色素。

储存和处理：

将试剂盒储存于4°C。使用前将所有组分恢复至室温。混合铁还原剂以溶解在冷冻过程中可能形成的任何沉淀。打开试剂瓶前请短暂离心。

检测步骤：

1.铁标准曲线：将10微升100mM的铁标准品用990微升去离子水稀释，生成1mM的铁标准品。将稀释后的铁标准品0、2、4、6、8和10微升分别加入96孔板中，生成每孔0、2、4、6、8和10纳摩尔的铁标准品。向每个标准品孔中加入5微升铁还原剂，并用铁检测缓冲液将所有标准品孔的体积调整至100微升。

2.样本测试：

-a.可以直接测试液体样本（如血清）中的亚铁（Fe??）、总铁（Fe??+Fe??）或铁（Fe??）。每孔最多可加入50微升血清。正常血清中铁水平约为10-40微摩尔。软组织或细胞可以用5-10倍体积的铁检测缓冲液（例如，每100毫克湿组织或约5×10?细胞用500微升铁检测缓冲液）进行匀浆。用探针超声仪或Dounce玻璃珠匀浆器充分匀浆组织样本，然后以16,000×g离心10分钟，将上清液转移至新的微量离心管中。所有最终读数应在标准曲线范围内。如果任何样本超出该范围，应适当稀释并重新运行。

-b.仅检测亚铁（Fe??）：将1-50微升样本加入96孔板的样本孔中，并用铁检测缓冲液将体积调整至每孔100微升。检测总铁（Fe??+Fe??）：将1-50微升样本加入96孔板的样本孔中。向每个样本中加入5微升铁还原剂，将Fe??还原为Fe??。用铁检测缓冲液将体积调整至每孔100微升。

-c.在37°C下，让Fe??完全还原为Fe??，持续30分钟。

-d.向含有铁标准品和测试样本的每个孔中加入100微升铁探针。充分混合。在37°C下，避光让颜色完全显色，持续60分钟。

3.测量：在微孔板读数器上监测593纳米处的吸光度。

4.典型结果：

5.计算：从所有其他标准品和样本读数中减去零标准品的读数。绘制标准曲线。确定标准曲线的斜率。将背景校正后的样本读数除以标准曲线的斜率，以获得每孔中的铁纳摩尔数。测试样本中的Fe??和总铁（Fe??+Fe??）直接从标准曲线确定。测试样本中的Fe??含量通过从总铁（Fe??+Fe??）中减去Fe??来计算。通过以下方法确定原始样本中的Fe??、Fe??或总铁（Fe??+Fe??）浓度：

-A.将每孔的纳摩尔数除以加入孔中的样本体积（微升）=每微升样本中的铁纳摩尔数

-B.将每微升样本中的铁纳摩尔数乘以上述2a中上清液的总体积=每样本中的总铁纳摩尔数

-C.将每样本中的总铁纳摩尔数除以用于制备样本的组织毫克数或细胞数量=每毫克组织（或每细胞数量等）中的铁纳摩尔数