尿素检测试剂盒KA1652的测定程序和结果计算说明

尿素检测试剂盒内包含了尿素检测所需的所有试剂和相关组份。简单快捷的方案设计和优化的试剂配比，为科研工作者提供优质的尿素检测实验分析方案。

尿素检测试剂盒：尿素测定试剂盒是一种定量比色法尿素测定方法。

艾美捷尿素检测试剂盒：

货号：KA1652

适用样本类型：支气管肺泡灌洗液（BAL）、细胞/组织培养液、牛奶、血浆、血清、尿液以及环境样本（如废水、土壤等）

样本体积：

对于96孔板：5微升[血清和血浆样本可以直接测定（n = 1）。尿液样本应在测定前用蒸馏水稀释50倍（n = 50）。] 或50微升[对于低尿素样本（< 5 mg/dL），例如组织/细胞提取物、BAL等，或者含有酚红的培养基]

对于比色皿：20微升，或者对于低尿素样本，使用200微升代替20微升。

检测方法：比色法

测定类型：定量

校准范围：0.08至100 mg/dL（13微摩尔至17毫摩尔）

检测下限：0.08 mg/dL（13微摩尔）

法规状态：仅限研究使用（RUO）

质量控制测试：标准曲线

标准曲线仅用于说明目的，不应用于计算未知样本。每次进行测定都应生成标准曲线。

储存说明：将试剂盒储存在-20℃。为了获得最佳结果，请按照协议中描述的方式储存各组分。避免反复冻融。

测定程序：

将试剂平衡至室温。在测定前短时间内，将试剂A和试剂B等体积混合，制备足够的工作试剂。混合后20分钟内使用工作试剂。

使用96孔板的程序：

血清和血浆样本可以直接测定（n = 1）。尿液样本应在测定前用蒸馏水稀释50倍（n = 50）。将5微升水（空白）、5微升标准品（50毫克/分升）和5微升样本（双份）转移到透明底部96孔板的孔中。

对于低尿素样本（< 5毫克/分升），例如组织/细胞提取物、支气管肺泡灌洗液等，将50微升水（空白）、50微升5毫克尿素/分升（50毫克/分升标准品在水中稀释10倍）和50微升样本（双份）分别转移到不同的孔中。对于含有酚红的培养基，将50微升培养基（空白）、50微升5毫克尿素/分升（50毫克/分升标准品在培养基中稀释10倍）和50微升样本（双份）分别转移到不同的孔中。

加入200微升工作试剂，并轻轻敲击以混合。

在室温下孵育20分钟（低尿素样本孵育50分钟）。

在520纳米处读取光密度。对于低尿素样本，在430纳米处读取光密度。

使用比色皿的程序：

按照96孔板测定的描述准备样本。将20微升水、标准品（50毫克/分升）和样本转移到适当标记的试管中。对于低尿素样本，使用5毫克/分升的标准品和200微升代替20微升。加入1000微升工作试剂，并轻轻敲击以混合。孵育20分钟（低尿素样本孵育50分钟），并在520纳米（或430纳米）处读取光密度。

结果计算：

样本的尿素浓度（mg/dL）计算公式为：

尿素浓度=(ODsample?ODblank)/(ODstandard?ODblank)×n×[STD]其中，ODsample、ODblank和ODstandard分别是样本、标准品和水的吸光度值。n是稀释因子。[STD] = 50（对于低尿素样本为5），尿素标准浓度（mg/dL）。换算：BUN（mg/dL）= [尿素] / 2.14。1 mg/dL尿素等于167 ?M、0.001%或10 ppm。

使用96孔板协议对生物样本进行双份测定。商业2%低脂牛奶（Kirkland）的尿素浓度为12.5 ± 0.9 mg/dL，Invitrogen胎牛血清为35.7 ± 0.1 mg/dL，人血清为22.1 ± 0.9 mg/dL，人血浆为22.3 ± 0.2 mg/dL，大鼠血清为31.8 ± 1.1 mg/dL，大鼠血浆为42.6 ± 0.1 mg/dL，新鲜人尿样本为1501 ± 52 mg/dL，人BAL样本为0.21 ± 0.03 mg/dL，细胞培养中为0.15至2.7 mg/dL。

96孔板测定中的标准曲线

尿素检测试剂盒文献参考：

Sahin E, Haubenwallner S, Kuttke M, Kollmann I, Halfmann A, Dohnal AB, Chen L, Cheng P, Hoesel B, Einwallner E, Brunner J, Kral JB, Schrottmaier WC, Thell K, Saferding V, Bluml S, Schabbauer GMacrophage PTEN Regulates Expression and Secretion of Arginase I Modulating Innate and Adaptive Immune Responses.J Immunol. 2014 Aug 15;193(4):1717-27. doi: 10.4049/jimmunol.1302167. Epub 2014 Jul 11.