ROS-ID缺氧/氧化应激检测试剂盒：活细胞同步分析方案，适用于显微镜与流式细胞术

一、背景与检测需求

缺氧（hypoxia）与氧化应激（oxidative stress）是细胞生理与病理过程中两个密切相关且相互影响的状态。缺氧可诱导线粒体活性氧产生增加，而氧化应激又可能加剧组织缺氧；二者共同参与肿瘤微环境、缺血再灌注损伤、神经退行性疾病、炎症及代谢性疾病等多种病理过程。传统的检测方法往往只能分别评估缺氧或氧化应激水平，难以在同一细胞群体中实现同步、动态的功能分析。因此，开发一种能够同时检测活细胞中缺氧与氧化应激水平的工具，对于理解二者之间的信号交互及机制关联具有重要意义。

由艾美捷代理的Enzo Life Sciences 推出的 ROS-ID 缺氧/氧化应激检测试剂盒（ROS-ID Hypoxia/Oxidative stress detection kit）（货号：ENZ-51042）正是针对这一需求设计的解决方案。该试剂盒被广泛引用，支持荧光显微镜与流式细胞术两种主流检测平台，适用于贴壁细胞和悬浮细胞。

二、试剂盒概述

该试剂盒的核心功能是：在活细胞中同时检测缺氧水平（红色荧光）和总氧化应激水平（绿色荧光）。试剂盒提供了一整套试剂，包括两种荧光探针以及相应的诱导剂（ROS诱导剂和缺氧诱导剂），可作为阳性对照，确保实验结果的可靠性。

试剂盒属于 Enzo 的 CELLESTIAL 产品线，该系列产品均经过严格的活细胞分析验证，适用于共聚焦显微镜、流式细胞术、微孔板读取仪以及高通量筛选（HTS/ HCS）等对一致性和可重复性要求较高的应用场景。

三、检测原理

3.1 缺氧检测探针（红色荧光）

缺氧状态下，细胞内硝基还原酶（nitroreductase）活性显著升高。本试剂盒中的缺氧红色检测探针（Hypoxia Red Detection Reagent）利用这一特性：探针分子含有一个硝基（Nitro）基团，在常氧条件下荧光被淬灭；当进入缺氧细胞后，硝基还原酶将硝基依次还原为羟胺（NHOH）和氨基（NH?），同时释放出荧光团，产生红色荧光信号。荧光强度与缺氧程度呈正相关。

3.2 氧化应激检测探针（绿色荧光）

氧化应激检测试剂（Oxidative Stress Detection Reagent）是一种非荧光、细胞通透性的总活性氧（ROS）检测染料。它能够直接与细胞内多种活性氧种类（包括过氧化氢、超氧阴离子、羟基自由基、过氧亚硝基等）发生反应。反应后生成绿色荧光产物，其激发峰位于约490 nm，发射峰位于约525 nm（标准荧光素滤光片通道）。

该探针具有广谱反应性，能够综合反映细胞整体的氧化应激水平，而非仅针对某一种特定ROS。

3.3 双色同时检测的兼容性

两种探针的荧光光谱无显著重叠：缺氧探针发射红色荧光（Texas Red 通道，激发596 nm/发射670 nm），氧化应激探针发射绿色荧光（FITC通道，激发490 nm/发射525 nm）。因此，二者可在同一样本中同时标记，互不干扰，实现双参数同步分析。

四、试剂盒组分

组分 描述

Hypoxia Red Detection Reagent 缺氧检测探针（红色）

Oxidative Stress Detection Reagent 氧化应激检测探针（绿色）

ROS Inducer (Pyocyanin) ROS诱导剂（吡氰胺），用于阳性对照

Hypoxia Inducer (DFO) 缺氧诱导剂（去铁胺，DFO），用于阳性对照

试剂盒不包含其他辅助试剂，用户需自备细胞培养基、缓冲液及相应器皿。

五、规格与检测通量

试剂盒提供两种规格：

规格代号 荧光显微镜检测次数 流式细胞术检测次数

K500 500 次 100 次

0125 125 次 25 次

说明：由于流式细胞术每个样本的细胞用量通常高于显微镜玻片样本，因此同一试剂盒在流式平台上的检测次数较少。用户可根据常用平台选择合适规格。

六、仪器兼容性与设置参数

6.1 荧光显微镜

氧化应激（绿色）：标准荧光素（Fluorescein）滤光片组，激发490 nm / 发射525 nm

缺氧（红色）：Texas Red 滤光片组，激发596 nm / 发射670 nm

同时适用于宽场荧光显微镜和共聚焦显微镜

6.2 流式细胞仪

配备蓝色激光（488 nm）即可同时检测两种荧光信号：

绿色荧光：FL1通道（530 nm ± 15 nm）

红色荧光：FL3或FL4通道（> 650 nm），取决于仪器配置

无需紫外或红色激光，降低仪器门槛

6.3 高通量筛选（HTS）兼容性

试剂盒已针对HTS应用进行优化，可适配自动化液体处理系统及高内涵筛选（HCS）平台，满足大规模化合物筛选或RNAi筛选的需求。

七、质量控制与性能验证

该试剂盒在生产过程中均经过严格的质量控制：

流式细胞术验证：使用试剂盒提供的染料及诱导剂，评估缺氧细胞和/或高氧化应激细胞群体的荧光信号变化。

显微镜成像验证：获取双色荧光图像，确认探针定位与信号特异性。

每批次产品均提供质控数据，确保批次间一致性。

八、储存与稳定性

参数 要求

短期/长期储存 -20°C

避免操作 反复冻融（避免 freeze/thaw cycles）

运输条件 干冰运输

有效期 按照产品标签标注日期，正确储存下可稳定至有效期结束