QA-Bio/艾美捷重组PNGase F，无差异性活性或比活性

重组PNGase F是从含有Elizabethkingia miricola基因克隆的大肠杆菌菌株中分离得到的。与天然酶（E-PNG01）相比，重组酶在活性或比活性上没有可检测的差异。

PNGase F能够从糖蛋白中切割天冬酰胺连接的（N-连接的）寡糖。PNGase F将天冬酰胺脱氨基化为天冬氨酸，同时保持寡糖完整。变性可以增加切割速率高达100倍。大多数天然蛋白仍然可以被完全N-去糖基化，但需要增加孵化时间。PNGase F在孵化条件下至少能保持72小时的活性。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白中发现的含有Alpha-(1,3)-连接的核心岩藻糖的寡糖；为此，请使用肽N-糖苷酶A。

PNGase F来源：来自大肠杆菌中Elizabethkingia miricola的重组PNGase F基因。

艾美捷QA-Bio-重组PNGase F：

货号：E-RPNG01

EC：3.5.1.52

内容：

60 ?l的小包装，包含0.3 U的重组PNGase F，在20 mM Tris-HCl，pH 7.5中

包含20 ?L和60 ?L包装尺寸

5倍PNGase F反应缓冲液7.5用于PNGase F 250 mM磷酸钠，pH 7.5

PNGase F变性溶液 2% SDS，1 M β-巯基乙醇

PNGase F Triton X-100 15%溶液

比活性 ：>25 U/mg

活性： 5 U/ml

分子量 ：35,000道尔顿

PNGase F的pH范围： 6-10，Z适pH 7.5

PNGase F建议用法：

向Eppendorf管中加入多达200 ?g的糖蛋白。用去离子水调整至35 ?l的最终体积。

加入10 ?l的5倍PNGase F反应缓冲液7.5和2.5 ?l的PNGase F变性溶液。在100?C加热5分钟。

冷却后，加入2.5 ?l的PNGase F Triton X-100并混合。

加入2.0 ?l的PNGase F至反应中。在37?C孵化3小时。

特异性 PNGase F从糖蛋白中切割天冬酰胺连接的（N-连接的）寡糖。PNGase F将天冬酰胺脱氨基化为天冬氨酸，同时保持寡糖完整。变性可以增加切割速率高达100倍。大多数天然蛋白仍然可以被完全N-去糖基化，但需要增加孵化时间。PNGase F在孵化条件下至少能保持72小时的活性。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白中发现的含有Alpha-(1,3)-连接的核心岩藻糖的寡糖；为此，请使用肽N-糖苷酶A。

比活性 定义为在37?C，pH 7.5下，每分钟催化1微摩尔RNase B释放N-连接寡糖的酶量。通过SDS-PAGE监测切割（切割后的RNase B迁移速度更快）。

储存 将酶储存在4?C。

QA-Bio-重组PNGase F文献参考：

Bayer, E.A., F. De Meester, T. Kulik and M. Wilchek. Preparation of deglycosylated egg white avidin. Appl Biochem Biotech 53: 1-9 (1995)

Elder, J.H. and S. Alexander. endo-b-N-Acetylglucosaminidase F: endoglycosidase from Flavobacterium meningosepticum that cleaves both high-mannose and complex glycoproteins. Proc Natl Acad Sci USA 79: 4540-4544 (1982)

Tarentino, A .L., C.M. Gomez and T.H. Plummer, Jr. Deglycosylation of asparagine-linked glycans by peptide :N-glycosidase F. Biochemistry 24: 4665-4671 (1985)

Tarentino A.L. and T.H. Plummer. Enzymatic deglycosylation of asparagine -linked glycans: purification, properties, and specificity of oligosaccharide-cleaving enzymes from Flavobacterium meningosepticum. Meth Enzymol 230: 44-57 (1994)

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