Biogradetech超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8) FAQ

超灵敏细胞计数试剂盒-8（CCK-8）通过利用高度水溶性的四唑盐-WST-8进行非常方便的测定。WST-8被细胞中的脱氢酶还原，产生橙色产物（甲赞），可溶解在组织培养基中。CCK-8是非放射性的，允许在细胞增殖和细胞毒性测定中进行灵敏的比色测定，以测定活细胞的数量。细胞中甲酰胺的含量与活细胞的数量成正比，可用于检测细胞增殖和细胞毒性。使用CCK-8的检测灵敏度高于使用其他四氮唑盐如MTT、XTT、MTS或WST-1的检测灵敏度。

艾美捷超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)基本参数：

目录号：D-AKE106-U

规格：1000T / 10000T

储存：在4°C下储存12个月，在-20°C下至少储存24个月，避光

超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)供应材料和储存条件：

试剂准备：

即用CCK-8溶液：即用，无需预混合成分。

程序分析：

注意：在实际实验之前，做一个预实验，以确定合适的细胞数量和培养时间。如果OD值过高，可以适当减少细胞数量，可以缩短添加CCK-8的孵育时间，或者可以减少CCK-8负载量

一、绘制标准曲线

1.用细胞仪计数制备的细胞悬浮液中的细胞数量，然后接种细胞。

2.用培养基稀释细胞，按顺序形成细胞浓度梯度，通常为5-7个细胞浓度梯度、每个浓度梯度4-6个多孔。

3.接种后，将粘附细胞或悬浮细胞孵育0.5-4h，每100μL培养基加入10μL CCK-8试剂孵育一定时间，然后测量OD450值。以单元格数为x轴，OD450值为y轴，绘制标准曲线。根据该标准曲线，可以确定未知样品中细胞的数量。使用该标准曲线的前提条件是测试条件完全相同

二、细胞活性测定方案

1.在96孔板中接种细胞悬浮液（100μL/孔）。将培养板放入湿润的二氧化碳培养箱中进行预培养。

2.在板的每个孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要将气泡引入井内，因为它们会干扰外径读数。

3.将培养板在培养箱中培养0.5-4小时。培养时间取决于细胞类型和细胞密度等实验条件。

4.使用微孔板读数器测量450 nm处的吸光度。

三、细胞增殖和细胞毒性测定方案

1.在96孔板中分配100μL细胞悬浮液（5000个细胞/孔）。预孵育用于24小时除湿二氧化碳培养箱的平板。

2.将1-10μL不同浓度的待测物质加入平板中。

3.将培养板在培养箱中培养适当的时间长度（例如，6、12、24或48小时）。

4.在板的每个孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要将气泡引入井内，因为它们会干扰外径读数。

5.将培养板在培养箱中培养0.5-4小时。培养时间取决于细胞类型和细胞密度等实验条件。

6.使用微孔板读数器测量450 nm处的吸光度

超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)FAQ：

1.本品敏感，OD值偶尔偏高。我们应该如何处理？

从三个方面进行调整：（1）使用不同数量的细胞进行检测，制作标准曲线，确定合适的细胞数量；（2） 缩短CCK-8的孵育时间；（3） 降低CCK-8的负载量，将CCK8稀释到合适的浓度以供使用。

2.如何确定该产品的检测范围？

建议制作不同细胞数的标准曲线，并根据稳定的线性趋势确定特定细胞的检测间隔。

3.如何设置细胞毒性测试？

设置方法有两种：（1）将1-10μL不同浓度的待测物质加入100μL的细胞悬浮液中，孵育适当的时间，然后加入系统中10%的溶液。（2） 在药物暴露于细胞一段时间后，使用10%CCK-8检测细胞增殖。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

Biogradetech生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。