补体P因子功能检测试剂盒--补体系统研究工具

研究目的：

目的是确定测试样本中因子P的功能。功能性是定性地与校准器（人血清）相关联来确定的，校准器被设定为100%功能性。

仅限于训练有素的实验室人员使用。结果不得用于临床诊断或患者管理。仅限研究使用。

概述和解释

因子P（补体P，适当蛋白，FP）是补体激活替代途径（AP）的正向调节器和启动因子。它结合到表面结合的C3和C5转化酶并稳定它们，以放大激活级联反应1。因子P的结合使转化酶复合体的半衰期增加约10倍2。有观点（尽管存在争议）认为，因子P也可以通过结合例如细胞表面或某些生物基质，招募C3b或C3(H2O)和因子B，从而启动AP途径1,3。因子P对抗因子H的负向调节，后者增强C3b和Bb的解离并介导因子I对C3b的切割，转化为非活性的iC3b3（图1）。

图1：因子P作为替代补体途径的稳定剂和启动因子（左），以及因子H的对立负向调节（右）。

与大多数补体蛋白不同，因子P不是在肝细胞中产生的，而是由包括单核细胞、巨噬细胞、T细胞和粒细胞在内的几种细胞类型产生。很可能局部刺激下因子P的短暂浓度增加会增强AP4。例如，中性粒细胞含有因子P的颗粒，这些颗粒在刺激下分泌，并且可以增强血小板-粒细胞聚集体的形成1。

在血浆中，因子P的浓度大约为4-25 ?g/mL5。因子P是一个延长的53 kDa糖蛋白，在体内以二聚体、三聚体或四聚体（P2、P3和P4）的形式寡聚，比例为26:54:20（P2:P3:P4），形成头对尾结构5,6。寡聚状态与C3转化酶稳定功能相关，寡聚体的分布影响因子P的整体功能性7。

突变、缺乏、蛋白水平以及因子P的蛋白沉积与疾病和障碍有关，由Chen等人总结3。缺乏通常增加对脑膜炎球菌病和其他传染病的易感性8。改变的血清水平已与例如C3肾小球病、狼疮性肾炎、败血症和慢性心力衰竭以及IgA肾病相关联9。

艾美捷补体P因子功能检测试剂盒（Complement Factor P Functional assay）（#COMPL FPF RUO）的测定原理：

因子P功能测定是一种酶联免疫吸附测定（ELISA）将功能性补体活性测定的原理与标记的使用相结合对沉积的补体蛋白具有特异性的抗体。已存入的补充金额蛋白质与样品中因子P的功能活性成正比。

补体P因子功能检测试剂盒组成：

一个带有微孔板（12x8）的框架，孔内涂有抗因子P单克隆抗体，用铝箔包装，并附有干燥剂包。

1.5毫升阴性对照（NC），绿色，绿色瓶盖。即用型。

3.0毫升校准器，200纳克/毫升。即用型。

32毫升稀释液（Dil），红色。即用型。

30毫升洗涤溶液，30倍浓缩。

活化剂，冻干型。

15毫升活化剂稀释液。即用型。

3.0毫升猝灭液。即用型。

7.5毫升结合物含有针对C3b的HRP标记抗体，蓝色，棕色瓶。即用型。

15毫升底物TMB，棕色瓶。即用型。

15毫升终止液（0.5M H2SO4）。即用型。

需要但未提供的物料或设备：

带有450纳米和620纳米滤光片的酶标仪

轨道摇床（200转/分钟）

带一次性吸头的精密移液管

96孔板或条的密封膜

96孔板或条的洗涤器

吸水纸

试剂和样品稀释用的容器

冰或相应的板冷却设备

计时器

稳定性和储存：

所有试剂应储存在2-8°C，活化剂除外。在2-8°C下储存时，稀释后的洗涤液有效期至套件的有效期。

冻干活化剂应储存在-20°C或更低温度。复溶后的活化剂可以在-70°C下冷冻，并且只能解冻一次。

标本收集和准备：

应使用无菌静脉穿刺技术收集全血样本，并使用标准程序获得血清或EDTA血浆。建议每个样本至少抽取5毫升全血。离心血样并将无细胞血清或血浆转移到干净的试管中。

离心后的血清或EDTA血浆可保存在4°C。较长时间储存时，血清和血浆样本应冷冻在-20°C或更低温度。建议在分析前不要将测试样本冻融超过两次。

每个实验室应确定测试样本储存条件的可接受性，因为这可能因预分析因素而异。

在进行补体P功能性分析之前，确定每个测试样本中因子P的浓度。对于这种因子P浓度的测定，可以使用Svar Life Sciences AB提供的因子P定量分析。

补体P因子功能检测试剂盒文献参考：

(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.

(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.

(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.

(4) Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular

Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.

(5) Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.

(6) Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.

(7) Moore, S. R.; Menon, S. S.; Galwankar, N. S.; Khuder, S. A.; Pangburn, M. K.; Ferreira, V. P. A Novel Assay That Characterizes Properdin Function Shows Neutrophil-Derived Properdin Has a Distinct Oligomeric Distribution. Frontiers in Immunology 2023, 13.

(8) Fijen, C. A. P.; van den Bogaard, R.; Schipper, M. Properdin Defciency: Molecular Basis and Disease Association. Molecular Immunology 1999, 36, 863–867.

(9) Michels, M. A. H. M.; Volokhina, E. B.; van de Kar, N. C. A. J.; van den Heuvel, L. P. W. J. The Role of Properdin in Complement-Mediated Renal Diseases: A New Player in Complement-Inhibiting Therapy Pediatr Nephrol 2019, 34 (8), 1349–1367.