铁检测试剂盒(Nitroso-PSAP)采用比色法检测铁离子浓度。其原理是利用弱酸性缓冲液使铁从转铁蛋白-铁复合物中解离出来,再通过还原剂将三价铁还原为二价铁。二价铁离子与Nitroso-PSAP(作为显色剂)反应生成蓝色络合物,该络合物的吸光度与样本中的铁浓度成正比。通过在740-760 nm波长范围内测量吸光度,即可定量检测样本中的铁含量
艾美捷JaICA铁检测试剂盒(Nitroso-PSAP):#CFE-010组成:
R-1 缓冲液:1x16毫升 即用型
R-2 缓冲液:1x7毫升 即用型
R-3 螯合显色剂:1x0.7毫升 即用型
STD 200微克/分升铁标准液:1x1.5毫升 即用型
测定准备:
1. 使用前将所有试剂平衡至室温。
2. 准备工作试剂:将70微升R-2与7微升R-3混合用于1次检测。
(例如)50次检测的准备
R-2:70微升x50次检测=3.5毫升
R-3:7微升x50次检测=350微升
在容器中混合3.5毫升R-2和350微升R-3。
样本准备:
血清/血浆:应通过过滤或离心去除血清和血浆样本中的不溶性物质。不能使用EDTA血浆。
尿液(24小时混合尿液)/生物液体:向样本中加入6M盐酸,调节pH至2.0-3.0(例如,向1毫升裂解液中加入5-10微升6M盐酸)。以6000转/分钟离心15分钟。收集上清液用于测定。
组织:加入5%TCA溶液,涡旋1分钟,在4-8°C下孵育30分钟。以6000转/分钟离心15分钟。收集上清液用于测定。
注意:样本pH应在pH 2到pH 8之间。
操作步骤:
样本处理:对于血清和血浆样本,需去除不溶性物质,可采用过滤或离心的方式。注意,EDTA-血浆不能使用。
试剂准备:试剂盒通常包含缓冲液和显色液(含Nitroso-PSAP)。
反应与测量:将样本与试剂混合后,二价铁离子与Nitroso-PSAP反应生成蓝色络合物,使用分光光度计在740-760 nm波长范围内测量吸光度。
结果计算:根据标准曲线计算样本中的铁浓度。
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