快速内切酶,可在5~15 min内完成反应,最适反应温度为37℃,受CpG甲基化影响,序列完全重叠,剪切受阻,失活条件为80℃温育20 min,3 h温育未表现星号活性,延时酶切可能出现星号活性。
艾美捷快速内切酶XhoI:
Cat #: C-BSM583
Size: 500 rxns
Storage: -20°C
快速内切酶XhoI组成:
Components Amount
FlyCut?" Xhol 500μl
10x CutOne' Buffer 3x1 ml
10x CutOne' Color Buffer 3×1 ml
使用方法:
1.快速DNA消化方案
①将以下反应组分按所示顺序在冰上混合:
对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化,则10×CutOne的量? 缓冲液应减少到2μl,以减少未纯化的PCR产物中剩余的金属离子。我们建议在消化用于克隆之前纯化PCR产物,因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。
②轻轻搅拌并向下旋转;
③在37°C下培养15分钟(质粒DNA)或15~30分钟(PCR产物)或30~60分钟(基因组DNA);
④ 可选:在80°C下加热20分钟使酶失活;
⑤如果CutOne? 在反应中使用颜色缓冲液,将反应混合物的等分试样直接装入凝胶中。
2.DNA的双重和多重消化
① 使用每种酶1μl,并适当扩大反应条件;
② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10;
③如果酶需要不同的反应温度,从需要较低温度的酶开始,然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。
3.扩大质粒DNA消化反应
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