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高品质肽N-糖苷酶F,糖蛋白,切切切

发布者:艾美捷科技    发布时间:2023-09-15     
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蛋白质糖基化(glycosylation)是指将糖链通过共价方式连接到目标蛋白分子上的过程,是在生物界普遍存在的一种蛋白质翻译后修饰。蛋白质糖基化在很多重要的生物学过程中发挥着关键作用,包括细胞黏附、分子转运和清除、受体激活、信号转导等。几乎所有的膜蛋白和分泌蛋白都含有糖基化修饰。常见的两种糖基化修饰为N-连接糖基化修饰和O-连接糖基化修饰,其中N糖糖基化修饰有多种不同类型的糖链,包括复杂糖链(complex,含有以岩藻糖、半乳糖和唾液糖为组分的糖链残基)、高甘露糖链(high-mannose,含有多个α-连接的甘露糖残基)、杂交型糖链(hybrid,兼有高甘露糖型、复杂型特点)。这些糖链可以影响生物分子的结构、功能和相互作用,从而调节细胞信号传导、分子识别、免疫应答等生物过程。

high-mannose.png

 

作为N-糖蛋白去糖基化酶,肽N-糖苷酶F(PNGase F,也称N-糖肽酶、N-糖酰胺酶、肽-N-糖苷酶)可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸,生成含有天冬氨酸的多肽链并释放完整的N-糖链。PNGase F广泛用于抗体及相关蛋白去糖基化,是目前应用最多的糖生物学分析工具酶,N-糖蛋白经PNGase F水解,获得的寡糖链可通过质谱、毛细管电泳等技术分析鉴定糖链结构及丰度,已在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病与糖基化研究中得到应用。


 

PNGase F.png


 

艾美捷作为Biogradetech的中国区独家代理,为您推荐高品质肽N-糖苷酶F(PNGase F):

货号

C-BSM3303

名称

PNGase F, His-tag  肽N-糖苷酶 F(His标签)

规格

15000U & 75000U

说明

本产品通过大肠杆菌重组表达,带有His标签,含有50%甘油, 常应用于抗体及其相关蛋白去糖基化。

酶活单位定义

1 个酶活力单位 (U) 指在 10 μl 反应体系中,37℃下反应 1 h 从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95% 碳水化合物所需要的酶量。

纯度检测

使用 SDS-PAGE 凝胶电泳检测,蛋白纯度不低于95%

糖苷酶与蛋白酶活性检测

无可检出的内切糖苷酶 F1、F2 或 F3 活性;无可检出的蛋白酶活性

使用方法

1. 变性条件下去糖基化 

① 将 1~20 μg 糖蛋白,1 μl 10× Denaturing Buffer 和 ddH2O(如 有必要)混合至总体积 10 μl; 注:10× Denaturing Buffer 在低温储存时可能出现白色沉淀,使用前可先在 37℃下温育使其溶解。

② 100℃反应 10 min 使糖蛋白变性后,冰上冷却,离心 10 s;

③ 加入 2 μl 10× PNGase F Buffer,2 μl 10% NP-40,补充 ddH2O 使总反应体积为 20 μl;

④ 加入 1~2 μl PNGase F,轻轻混匀,37℃孵育 1~3 h。

2. 非变性条件下去糖基化

① 将 1~20 μg 糖蛋白,2 μl 10× PNGase F Buffer 和 ddH2O(如 有必要)混合至总体积 20 μl;

② 加入 2~5 μl PNGase F, 轻轻混匀;

③ 37℃ 孵育 4~24 h。


Biogradetech生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商:Biogradetech成立于2015年,总部位于美国加利福尼亚州,早期以产品技术研发服务起家,逐步发展了广泛的产品线,并将其商业化销售,包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。


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