BPS Bioscience Th2细胞分化研究工具：IL-4/IL-13 响应型 STAT6 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系

IL-4/IL-13响应型STAT6荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种稳定整合了受STAT6响应元件控制的萤火虫荧光素酶报告基因和人类STAT6（信号转导及转录激活因子6）的HEK293细胞系，形成了一个完全功能的STAT6信号通路。该细胞系已通过人类IL-4（白细胞介素-4）和IL-13（白细胞介素-13）的激活实验以及使用抗IL-4R和抗IL-13R拮抗剂进行了验证。

背景

转录因子STAT6（信号转导及转录激活因子6）在免疫细胞中扮演着至关重要的角色。IL-4激活的STAT6信号对于Th2分化和免疫球蛋白类别转换是必需的，它还介导巨噬细胞中炎症增强子的直接抑制。STAT6参与过敏性炎症疾病的多个方面，如气道高反应性、嗜酸性粒细胞浸润和肥大细胞反应。STAT6主要被IL-4和相关的IL-13激活，它们具有重叠的生物学特性。当IL-4和IL-13结合时，由IL-4Ralpha和IL-13Ralpha1组成的受体复合物激活与受体相关的Janus激酶（JAK1和Tyk2），从而导致STAT6的激活。激活的STAT6形成同源二聚体，转移到细胞核中，在那里它们结合响应基因的启动子，诱导基因转录。尽管这两种细胞因子都激活STAT6信号，但已证明IL-4在启动这一信号通路方面比IL-13更有效。STAT6通路的功能障碍会导致过敏反应（哮喘、特应性皮炎、食物过敏）和癌症（霍奇金病、中枢神经系统和滤泡性淋巴瘤）。STAT6可以作为诊断和预后工具。抑制剂已被证明可以减少动物模型中的急性炎症，未来的发展可能会导致新的针对STAT6相关病理的治疗工具。

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应用

? 筛选和表征STAT6信号通路的激活剂或抑制剂。

? 筛选抗IL-4、抗IL-4R、抗IL-13或抗IL-13R抗体。

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到含有10 ml预热的解冻培养基1的试管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在5 ml预热的解冻培养基1中重悬。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。在首次传代及后续传代中，使用生长培养基1M。

细胞传代

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% 胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1M并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在生长培养基1M中重悬。

4. 按照推荐的亚培养比例1:5至1:10，每周一次或两次将细胞种入新的培养容器中。

注意：解冻后和细胞密度低时，细胞可能生长速度较慢。在这些情况下，建议以1/4的比例分离细胞。经过几次传代后，细胞生长速度加快，可以使用更高的比例分离细胞。

细胞冷冻

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05% 胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1M并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬，细胞浓度约为2 x 10^6个细胞/ml。

4. 将1 ml的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下保存过夜。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

图1：IL-4/IL-13响应型STAT6荧光素酶报告基因HEK293细胞系对人类IL-4和IL-13的反应。

IL-4/IL-13响应型STAT6荧光素酶报告基因HEK293细胞与不同浓度的人类IL-4（左图）和IL-13（右图）共培养6小时。使用ONE-Step?荧光素酶检测系统测量荧光素酶活性。结果以STAT6荧光素酶报告基因表达的诱导倍数显示，与无激动剂的细胞活性相对比。

文献参考：

Kasaian MT., et al., 2013. Am J Respir Cell Mol Biol. 49(1):37-46.

Czimmerer Z., et al., 2018. Immunity 48(1):75-90.e6. 

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