BPS Bioscience STAT3信号转导监测器：STAT3 报告基因（eGFP）-HEK293 细胞系

STAT3报告基因（eGFP）-HEK293细胞系旨在监测STAT3信号转导途径。它包含一个由位于最小TATA启动子上游的STAT3响应元件驱动的eGFP基因。在细胞因子和生长因子激活后，内源性STAT3结合到DNA响应元件上，诱导eGFP报告基因的转录。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品STAT3 报告基因（eGFP）-HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用

? 监测STAT3信号通路活性

? 筛选STAT3信号通路的激活剂或抑制剂

细胞培养协议

细胞解冻

1. 为了解冻细胞，建议将液氮中的冷冻细胞快速在37°C水浴中解冻，然后将瓶中全部内容转移到含有10毫升解冻培养基1（不含普鲁霉素）的管中。

2. 离心细胞，去除上清液，并在5毫升预热的解冻培养基1（不含普鲁霉素）中重新悬浮细胞。

3. 将重新悬浮的细胞转移到T25培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 细胞应在完全融合前进行传代。在首次传代时，转换为生长培养基1N（含普鲁霉素）。

细胞传代

1. 传代细胞时，去除培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并使用0.05%胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 分离后，加入生长培养基1N（含普鲁霉素），转移到管中，离心细胞，重新悬浮细胞在生长培养基1N中，并将适量的细胞悬浮液种植到新的培养容器中。传代比例：每周或每两周1:5至1:10。

细胞冷冻

1. 冷冻细胞时，去除培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并使用0.05%胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 分离后，加入解冻培养基1（不含普鲁霉素）并计数细胞，然后转移到管中，离心细胞，并在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重新悬浮，细胞浓度约为2 x 10^6细胞/ml。

3. 将1毫升的细胞悬浮液分装到冷冻管中。将管放入绝缘容器中缓慢冷却，并在-80°C下保存过夜。

4. 次日转移到液氮中保存。

验证数据

通过抗IL-6R抗体抑制IL-6诱导的STAT3活性

1. 收集STAT3报告基因（eGFP）-HEK293细胞，并在80微升细胞培养基中以每孔20,000细胞的密度种植到白色透明底96孔微孔板中。在37°C、5% CO2条件下过夜培养细胞。

2. 次日，在将被IL6刺激的孔中加入所需浓度的抗IL-6R抗体（R&D Systems, #MAB227）10微升（最终抗IL-6R抗体浓度= 2-20纳摩尔）。在37°C、5% CO2条件下培养细胞一小时。对于未经抗体处理的对照细胞，加入10微升新鲜培养基。

3.

a. 在标记为“IL6-stimulated”的孔中加入稀释的人IL-6 10微升（最终IL-6浓度= 2纳克/毫升）。

b. 在未刺激的对照孔中加入10微升培养基（用于确定未刺激的报告基因活性）。

4. 在37°C、5% CO2条件下培养细胞24-48小时。

5. 在荧光显微镜下观察eGFP的表达（激发/发射=488/510纳米）。

图1. 抗IL-6R抗体在STAT3（eGFP）报告基因HEK293细胞中抑制IL-6诱导的报告基因活性。

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