BPS Bioscience Anti-H3K9/14ac多克隆抗体--高效亲和纯化

针对组蛋白H3在赖氨酸9和14位点乙酰化（H3K9/14ac）的多克隆抗体，使用KLH偶联合成肽进行免疫。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品Anti-H3K9/14ac多克隆抗体。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Anti-H3K9/14ac多克隆抗体：

克隆性：多克隆  

宿主物种/表达系统：兔  

纯化方式：亲和纯化  

形式：水溶液缓冲液  

配方：含有0.05%叠氮化物和0.05% ProClin 300的PBS  

浓度：50 ?g/36 ?l  

免疫原：合成肽  

背景：H3K9/14的乙酰化富集于活性基因的启动子附近。  

储存/稳定性  

在-80°C下储存，最长可达2年。首次解冻后离心以最大化产品回收。分装以避免反复冻融。分装样本可在-20°C下至少保存一个月。

针对H3K9/14ac的抗体进行的染色质免疫沉淀（ChIP）结果  

使用HeLa细胞、针对H3K9/14ac的抗体（货号25264）和优化的qPCR引物对进行ChIP实验。实验使用了150万细胞的剪切染色质。分析了1、2、5和10 ?g抗体的滴定实验。使用5 ?g/IgG作为阴性免疫沉淀对照。使用针对ACTB基因启动子的特异性引物作为阳性对照靶点，以及针对MB基因外显子2的引物作为阴性对照靶点进行qPCR。图1显示了回收率（免疫沉淀DNA与输入DNA的相对量）。这些结果证实了H3K9/14乙酰化存在于活性启动子上的观察结果。

针对H3K9/14ac的抗体进行的ChIP-seq结果  

使用1 ?g针对H3K9/14ac的抗体（货号25264）在100万HeLaS3细胞的剪切染色质上进行ChIP实验。使用2 ?g/IgG作为阴性免疫沉淀对照。使用针对活性GAPDH和c-fos基因启动子的优化PCR引物对进行qPCR分析，作为阳性对照靶点；使用非活性MB基因的编码区和Sat2卫星重复序列作为阴性对照靶点（图2A）。随后，对免疫沉淀的DNA进行Illumina基因组分析仪分析。文库制备、簇生成和测序均按照制造商的说明进行。36 bp的标签通过ELAND算法与人类基因组进行比对。图2显示了完整序列和X染色体800 kb区域（图2B和C）以及围绕RBM3、GAPDH和c-fos基因的100 kb区域（图2D、E和F）的峰分布。这些结果清楚地显示了H3K9/14双重乙酰化在活性基因启动子上的富集。

抗体滴度测定  

为测定抗体滴度，使用针对H3K9/14ac（货号25264）的抗体进行ELISA实验，采用梯度稀释法，粗提血清和流穿液在抗原包被的孔中进行检测。使用的抗原是含有感兴趣组蛋白修饰的肽。通过绘制吸光度与抗体稀释度的关系图（图3），估计纯化抗体的滴度为1:5,900。

针对H3K9/14ac的抗体交叉反应性测试  

通过点样分析（Dot Blot）测试针对H3K9/14ac（货号25264）的抗体与其他组蛋白修饰和未修饰H3K9/14序列的肽的交叉反应性。将100至0.2 pmol的相应肽点样在膜上。抗体使用1:20,000的稀释度。图4显示了抗体对感兴趣修饰的高度特异性。

Western Blot分析  

使用针对H3K9/14ac（货号25264）的抗体对HeLa细胞的组蛋白提取物（15 ?g）进行Western Blot分析，抗体在含有5%脱脂奶粉的TBS-Tween中稀释1:1,000。感兴趣的蛋白位置在右侧标出，左侧为分子量标记（单位为kDa）。

免疫荧光分析  

使用针对H3K9/14ac（货号25264）的抗体和DAPI对小鼠NIH3T3细胞进行染色。细胞用4%甲醛固定10分钟，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100封闭。细胞用H3K9/14ac抗体（左侧）在封闭液中稀释1:500进行免疫荧光标记，随后使用与Alexa488偶联的抗兔抗体进行检测。中间面板显示DAPI对细胞核的染色。右侧为两种染色的合并图。

应用  

ChIP/ChIP-seq（1-2 ?g/IP）  

ELISA（1:100）  

点样分析（Dot Blot，1:20,000）  

Western Blot（1:1000）  

免疫荧光（Immunofluorescence，IF，1:500）  

运输温度：-20°C或-80°C  

物种反应性：人、小鼠  

注意事项：每IP的最佳抗体用量应由终端用户确定。建议测试1-5 ?g/IP。  

警告：避免反复冻融。  

科学分类：抗体  

监管状态：仅限研究使用

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现a。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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