BPS Bioscience Anti-H3K4me1多克隆抗体实验条件和结果分析

针对含有单甲基化赖氨酸4的组蛋白H3（H3K4me1）的多克隆抗体，使用KLH偶联的合成肽作为免疫原。  

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品Anti-H3K4me1多克隆抗体。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Anti-H3K4me1多克隆抗体：

克隆性：多克隆  

宿主物种/表达系统：兔  

纯化方法：亲和纯化  

形式：水溶液缓冲液  

配方：含有0.05%叠氮化物和0.05% ProClin 300的PBS溶液  

浓度：50 ?g/18 ?l  

免疫原：合成肽  

储存/稳定性  

在–80°C下可保存长达2年。首次解冻后离心以最大化产品回收。分装以避免反复冻融循环。分装可在–20°C下保存至少一个月。

实验条件  

染色质免疫沉淀（ChIP）结果  

使用针对H3K4me1的抗体（产品编号25253）对100万HeLaS3细胞的剪切染色质进行染色质免疫沉淀（ChIP）实验。实验中使用1 ?g、2 ?g、5 ?g和10 ?g的抗体进行梯度实验分析。以2 ?g IgG作为阴性免疫沉淀（IP）对照。通过定量PCR（qPCR）分析，使用特异性引物检测ACTB和GAS2L1基因周围的区域（作为阳性对照）以及GAPDH和EIF4A2基因的启动子（作为阴性对照）。图1显示了回收率，以输入DNA的百分比表示（免疫沉淀DNA与输入DNA的相对量）。

染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）结果  

如上所述，使用1 ?g针对H3K4me1的抗体（产品编号25253）进行染色质免疫沉淀（ChIP）。随后，免疫沉淀的DNA在Illumina基因组分析仪上进行分析。文库制备、簇生成和测序均按照制造商的说明进行。使用ELAND算法将36 bp标签与人类基因组对齐。图2A和B展示了围绕ACTB和GAS2L1阳性对照基因的染色体区域的富集情况。用于qPCR验证的扩增子位置用箭头表示。图2C和D分别展示了5号染色体和X染色体两个1 Mb区域的H3K4me1信号。

滴度测定  

通过ELISA实验测定抗体滴度，使用针对H3K4me1的抗体（产品编号25253）的系列稀释液，并在抗原包被的孔中进行检测。实验中使用的抗原是含有目标组蛋白修饰的肽段。通过绘制抗体稀释度与吸光度的关系图（图3），估算抗体的滴度为1:20,100。

交叉反应性测试  

通过点样（Dot Blot）分析测试针对H3K4me1的抗体（产品编号25253）与其他组蛋白H3和H4的修饰或未修饰序列的交叉反应性。将含有相应修饰的肽段（100至0.2 pmol）点样于膜上，抗体稀释度为1:10,000。图4显示该抗体对目标修饰具有高度特异性。

Western Blot分析  

对HeLa细胞的全细胞提取物（25 ?g，泳道1）和组蛋白提取物（15 ?g，泳道2）以及1 ?g的重组组蛋白H2A、H2B、H3和H4（分别对应泳道3、4、5和6）进行Western Blot分析，使用针对H3K4me1的抗体（产品编号25253）。抗体稀释度为1:500，使用含有5%脱脂奶粉的TBS-Tween缓冲液。右侧标记了目标蛋白的位置，左侧显示了分子量标记（单位：kDa）。

应用  

- 染色质免疫沉淀/染色质免疫沉淀测序（ChIP/ChIP-seq）：1 – 2 ?g/ChIP  

- 酶联免疫吸附试验（ELISA）：1:500  

- 点样（Dot Blot，DB）：1:10,000  

- Western Blot（WB）：1:500  

运输温度：–20°C或–80°C  

物种反应性：人  

注意事项：每IP的最佳抗体用量应由最终用户确定。建议测试1–5 ?g/IP。  

警告：避免反复冻融循环。  

科学分类：抗体  

监管状态：仅限研究使用

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现a。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

作为BPS Bioscience在中国的区域代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BPS Bioscience以及客户订制化服务。