预活化的PE [R-藻红蛋白]使用说明

藻红蛋白是从红藻中分离纯化的，具有较强的荧光性、良好的吸光度和较高的量子产率。它在可见光谱区具有很宽的激发和发射范围。通过使用传统的标记方法，它可以很容易地与生物素、抗生物素和各种单克隆抗体结合形成荧光探针，用于抗体荧光标记，如荧光显微镜、荧光免疫分析、双或多色荧光分析、癌症细胞表面抗原检测、流式细胞术荧光测量、，以及诊断和生物工程技术，例如体内成像应用。活化的藻红蛋白很容易与抗体和其他蛋白质结合，而不需要化学交联剂。这些高度纯化的藻红蛋白在结合后保持其光谱特征。用4-（N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺基（SMCC）处理活化的hycoerythrin，该琥珀酰胺基与赖氨酸残基反应，使马来酰亚胺基团与偶联伴侣蛋白的游离硫醇反应。当与含硫醇的靶标混合时，可以直接偶联，无需进一步预处理。

艾美捷预活化的PE [R-藻红蛋白]：

Cat #: B-CHM305

Size: 1 mg

Storage: Store at 4°C, protected from light

预活化的PE [R-藻红蛋白]特性：

形式：液体

光谱特性：Ex/Em=450-500纳米/575±5纳米

纯度：Amax/A280>5.0

运输和储存

储存条件：4°C避光保存。不要冻结。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少6个月。

预活化的PE [R-藻红蛋白]使用说明：

1.抗体修饰

1） 将抗体修饰试剂（DTT/TCEP）溶于ddH20中，制备2mg/ml抗体修饰缓冲液。

2） 使用PBS缓冲液将待标记抗体的浓度（纯度>90%）调节至约5-10 mg/ml。向每毫克抗体中加入10μl抗体修饰缓冲液，轻轻混合。在室温下搅拌混合物60-90分钟。

3） 反应完成后，将混合物转移到离心过滤管中，并加入MES缓冲液。离心过滤器多次以除去过量的抗体修饰缓冲液。过滤器中收集的溶液是经修饰的抗体，应将其调节至1-5mg/ml的浓度。

2.活化的R-藻红蛋白与抗体的结合

1） 使用MES缓冲液将活化的R-藻红蛋白的浓度调节至5 mg/ml。为了获得R-PE的准确重量，我们建议使用R-PE的消光系数进行测量（[R-PE]=0.1245×

A565，其中[R-PE]是以mg/ml为单位的浓度，A565是565nm处的吸光度，优选在0.3-0.8的范围内）。

2） 将修饰的抗体与活化的R-藻红蛋白以1:3的质量比混合（每mg修饰的抗体3 mg活化的R藻红蛋白）。在室温下避光反应2小时。

3） 将NEM溶解在无水二甲基亚砜（DMSO）中，制备12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。在步骤2）的反应混合物中，每毫克抗体加入5μl-NEM溶液，以阻断任何剩余的活性基团。

4） 将步骤3）中的溶液转移到离心过滤管中，并通过重复离心去除阻塞缓冲液。

5） 将标记的抗体分成等分，添加适当的防腐剂，并在-20°C下储存以备将来使用。

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