Anti-V-ATPase抗体--针对氧化敏感性优化的专用抗体

1. 产品描述与基本特性

由艾美捷代理Agrisera推出的Anti-V-ATPase 抗体 (货号：AS07 213)是一款针对植物液泡膜 H?-ATP 酶（V-ATPase）E 亚基的高品质兔源多克隆抗体。该抗体的免疫原为 KLH 偶联合成肽段，其序列依据植物 V-ATPase 亚基 E 设计，覆盖了拟南芥中 VHA-E1 至 E3 三种亚型（UniProt: Q39258-1），确保了识别的广谱性与特异性。该抗体经抗原亲和纯化，以冻干粉形式提供，每瓶含 50 ug 纯化 IgG。

关键特性概览：

宿主/类型： 兔 / 多克隆

纯度/形式： 抗原亲和纯化，溶于 PBS (pH 7.4) / 冻干粉

含量/重构： 50 ug，加入 50 ul 无菌水（终浓度约 1 ug/?l）

储存要求： 冻干粉或重构后溶液均储存于 -20°C；建议分装保存，避免反复冻融；开管前请短暂离心。

2. 应用与推荐稀释比例

该抗体经过严格验证，支持多种实验技术，适用于从组织水平到分子水平的 V-ATPase 检测：

应用技术 | 推荐稀释比例 | 应用说明

免疫荧光 (IF) | 1 : 100 | 适用于细胞或组织切片的荧光定位观察

免疫组织化学 (IHC) | 1 : 50 | 适用于石蜡或冰冻切片的显色检测

免疫印迹 (Western blot) | 1 : 2000 - 1 : 5000 | 推荐起始稀释比例 1:2000，可根据信号强度优化

关键功能定位： 该抗体可作为 液泡膜（Tonoplast membrane）的细胞区室标志物，是确认液泡膜分离纯度和研究液泡动态变化的可靠参照。

3. 分子量信息

理论分子量 (Expected MW)： 26 kDa（拟南芥）

表观分子量 (Apparent MW)： 31 kDa（拟南芥）

该差异可能源于 E 亚基的翻译后修饰或凝胶迁移特性，属正常现象。实验时应以 31 kDa 位置的特异性条带作为阳性信号判断标准。

4. 样品处理与实验关键提示

V-ATPase 对 SDS 缓冲液的氧化还原状态高度敏感。为确保获得清晰、可重复的 Western blot 结果，请严格遵守以下操作规范：

DTT 使用要求： 建议在样品缓冲液中加入新鲜配制的 二硫苏糖醇（DTT），终浓度不低于 50-100 mM。

注意事项： 请务必在实验当天新鲜配制 DTT 溶液，避免使用已反复冻融或长期存放的还原剂，以保证充分的还原环境，防止 E 亚基发生氧化交联导致条带弥散或异常。

5. 反应特异性

该抗体经过序列保守性设计，具有广泛的物种兼容性。其免疫原基于拟南芥 VHA-E1 至 E3 亚型序列设计，预计可识别多种高等植物中的 V-ATPase E 亚基。

6. 背景信息

液泡膜 H?-ATP 酶（V-ATPase）是植物细胞中负责液泡酸化和离子转运的核心酶复合体。该酶由膜外周催化结构域（V?）和跨膜质子通道结构域（V?）两部分组成，通过水解 ATP 将质子泵入液泡腔，建立跨液泡膜的质子驱动力。

V-ATPase 承担双重生理功能：

稳态维持 (House-keeping)： 为液泡内次级转运蛋白（如离子通道、反向转运体）提供质子驱动力，调节细胞内 pH 和离子稳态；

胁迫响应 (Stress response)： 在盐胁迫、干旱和重金属胁迫等逆境条件下，V-ATPase 活性上调以维持细胞离子平衡和渗透调节能力。

E 亚基（亦称 EMB2448，Protein EMBRYO DEFECTIVE 2448）属于 V? 外周结构域的组成部分，对复合体的组装和活性调控具有重要作用。该抗体为研究 V-ATPase 的表达调控、亚基组装、液泡功能以及植物环境适应机制提供了可靠的检测工具。

7. 部分引用文献：

Fan et al. (2026). Heat-triggered phospholipid flipping stabilizes plasma membrane fluidity. Nature . 2026 Jul;655(8124):1060-1069. doi: 10.1038/s41586-026-10726-x.

Holzner et al. (2026). The chloroplast ionome shines light on the dynamics of organellar iron homeostasis. Plant Cell. 2026 Jan 29:koag017. doi: 10.1093/plcell/koag017.

Ramakrishna et al. (2025). Elemental cryo-imaging reveals SOS1-dependent vacuolar sodium accumulation. Nature. 2025 Jan;637(8048):1228-1233. doi: 10.1038/s41586-024-08403-y. Epub 2025 Jan 15.