许多具有生物活性的肽和蛋白质以焦谷氨酸(pGlu)作为其第一个氨基酸。这种修饰可以保护它们免受氨基肽酶的降解,并且在许多情况下决定了蛋白质或肽的功能。然而,焦谷氨酸修饰有时也可能导致负面副作用。例如,经过焦谷氨酸修饰的β-淀粉样肽(pGlu-Aβ)比未修饰的淀粉样肽聚集速度更快,并且会形成毒性寡聚物,可能会损伤神经元。最近的研究将pGlu-Aβ与阿尔茨海默病联系起来,因为它是淀粉样斑块的主要成分之一。
焦谷氨酸可以在谷氨酰胺或谷氨酸自发转化为焦谷氨酸时形成。然而,在谷氨酰胺环化酶(QC)的存在下,这种环化反应速率会显著增加,谷氨酰胺环化酶也被称为谷氨酰胺肽环转移酶(QPCT)。人类谷氨酰胺环化酶已从神经组织中分离出来,并在脑脊液和唾液中被检测到。
SensoLyte绿色谷氨酰胺环化酶活性检测试剂盒提供了一种便捷的两步均相程序,用于使用绿色荧光底物测量来自各种来源的酶活性。在第一步中,底物与谷氨酰胺环化酶或含酶样本一起孵育,并转化为焦谷氨酸形式。在第二步中,加入谷氨酰胺环化酶显色剂以去除pGlu残基并生成绿色荧光团。该荧光团可以在490 nm激发波长和520 nm发射波长下被检测到。产生的荧光强度与酶活性成正比。该试剂盒非常适合用于高通量筛选(HTS)谷氨酰胺环化酶激活剂和抑制剂。绿色荧光团的长波长受细胞成分和测试化合物自身荧光的干扰较小。检测灵敏度为1.5 ng/mL的活性酶。
艾美捷AnaSpec-SensoLyte绿色谷氨酰胺环化酶活性检测试剂盒(#AS-72230)成分:
成分A:谷氨酰胺环化酶绿色底物:DMSO中的0.5 mM,50 ?L
成分B:焦谷氨酸荧光底物标准品:DMSO中的0.5 mM,15 ?L
成分C:谷氨酰胺环化酶(人重组):50 ?g/mL,10 ?L
成分D:谷氨酰胺环化酶显色剂,250倍浓缩:25 ?L
成分E:检测缓冲液:30 mL
成分F:谷氨酰胺环化酶抑制剂(1-苄基咪唑):DMSO中的1 M,75 ?L
特性:
吸收波长(nm):490
发射波长(nm):520
储存条件:将成分C和D储存于-80°C。将其他所有成分储存于-20°C。成分E可在室温下储存以便于使用。保护成分A和B免受光照和潮湿。
活性:
应用:FRET(荧光共振能量转移)、蛋白酶活性检测
生物标志物靶点:谷氨酰胺环化酶
检测方法:荧光法
检测限:1.5 ng/mL
研究领域:
细胞生物学与蛋白质分析
神经科学
子分类研究领域:
阿尔茨海默病
用途:仅限研究使用
来源:
宿主
大肠杆菌(E. coli)和杆状病毒(Sf 21)衍生
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