ALPCO 猪结合珠蛋白ELISA，为急性期蛋白研究提供精准数据

触珠蛋白检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于猪血清和血浆中触珠蛋白的测定。仅供研究使用。不是为了用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品猪结合珠蛋白ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

小鼠触珠蛋白ELISA检测原理：

如图1所示，在这种测定中，样品中的触珠蛋白与已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗触珠蛋白抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗触珠蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的触珠蛋白形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来测定结合的酶。结合的酶量与测试样品中触珠蛋白的浓度成正比；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中触珠蛋白浓度的量度。测试样品中触珠蛋白的量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。

所需材料但未提供

精密移液器（2微升至1000微升），用于制备和分配稀释液

试管

微孔板洗涤器/抽吸器

蒸馏水或去离子水

微孔板读取器

用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

计时器

离心机

抗凝剂（血浆样品）

样品收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样品出现凝块、明显溶血、脂血，或样品的完整性存在问题，请做好记录并谨慎解释结果。下列样品收集和储存条件仅供参考。未评估样品的稳定性。

血清样品 - 应通过静脉采血。血凝块形成后，通过离心分离血清。移除血清并立即进行测定，或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

血浆样品 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行测定或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

已知干扰物质 - 浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

样品稀释

测定要求每个测试样品在使用前进行稀释。每次进行测定时，所有样品都应进行双重测定。推荐的稀释比例仅供参考。稀释比例应基于未知样品的预期浓度，以使稀释后的样品落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样品水平，在运行整个板之前，强烈建议对一个或两个代表性样品进行系列稀释。

血清和血浆样品 - 建议的起始稀释比例为1:10,000。要制备1:10,000的样品稀释液，将5微升的样品转移到495微升的1X稀释液中。这会产生1:100的稀释液。接下来，将1:100的稀释液再稀释，将5微升转移到495微升的1X稀释液中。这会产生1:10,000的稀释液。每个阶段都要彻底混合。

试剂准备

稀释液浓缩液 - 提供的稀释液为5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，4份去离子水）稀释1:5。

洗涤液浓缩液 - 提供的洗涤液为20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，19份去离子水）稀释1:20。浓缩液在储存温度较低时可能会形成晶体。稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。

酶抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条添加10微升酶抗体结合物至990微升1X稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀但轻柔地混合。避免起泡。

预包被ELISA微孔板 - 按提供状态直接使用。揭开铝箔袋，从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有条和孔，放回袋中并重新密封，同时放入干燥剂。

猪触珠蛋白校准液 - 根据批次特定的分析证明进行准备。

结果计算

从每个孔的值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。

对每个标准的平均重复读数进行平均，并使用结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑曲线拟合的计算机软件来减少数据，构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合；然而，它们对数据的拟合将不够精确。

从标准曲线中插值样品值。校正稀释因子，以得到原始样品中触珠蛋白的浓度。

附录A - 参考血清信息

此试剂盒中包含一瓶参考血清。请参阅随附的产品概况表以获取批次特定信息。请注意以下事项：

收到参考血清后应立即冷冻。如果储存得当，直到过期日期前都是稳定的。

参考血清应适当稀释，以适应标准曲线范围。请参阅协议中的“样品稀释”部分以获取说明。

在移液样品（程序部分）时，也应双重移液参考血清。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。