白蛋白是一种多功能的蛋白质,通过血液动力学、运输和营养的机制为体内稳态做出贡献。
白蛋白在所有哺乳动物和许多较低等的脊椎动物的血管内外都存在。它是一个大约67,000道尔顿的分子,由肝脏合成。
通常只有非常微量的白蛋白能逃脱肾脏肾小球的重吸收,并被排泄到尿液中。
许多隐性疾病都可能造成肾脏损伤,这可能导致过量的血清蛋白,包括白蛋白,被肾脏排泄到尿液中。
这个ELISA试剂盒可以用来测量猴子血清、血浆和尿液中的白蛋白。
白蛋白试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫吸附测定(ELISA),用于测量猴子血清、血浆和尿液中的白蛋白。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品猴子白蛋白ELISA试剂盒,96孔。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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猴子白蛋白ELISA试剂盒,96孔 | ALP-41-ALBMK-E01 | 查看 |
猴子白蛋白ELISA试剂盒,96孔检测原理:
双抗体夹心酶联免疫吸附测定的原理在图1中表示。在这种测定中,样品中存在的白蛋白与已经吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗白蛋白抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗白蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的白蛋白形成复合物。经过另一次洗涤步骤后,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来测定免疫吸附剂上结合的酶。结合的酶量与测试样品中白蛋白的浓度直接相关;因此,450纳米处的吸光度是测试样品中白蛋白浓度的量度。测试样品中白蛋白的量可以从标准品构建的标准曲线中插值得到,并根据样品稀释进行校正。
试剂(足够96次测定的数量)
1. 稀释液浓缩液(测定缓冲液)
一瓶含有50毫升5倍浓缩的稀释测定缓冲液。
2. 洗涤液浓缩液20倍
一瓶含有50毫升20倍浓缩的洗涤液。
3. 酶-抗体结合物100倍
一瓶含有150微升亲和纯化的抗白蛋白抗体,与辣根过氧化物酶结合,并在稳定缓冲液中。
4. 显色底物溶液
一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢,在柠檬酸缓冲液中,pH值为3.3。
5. 终止液
一瓶含有12毫升0.3M硫酸。
警告:避免与皮肤接触。
6. 抗白蛋白ELISA微孔板
十二个可移动的八(8)孔微孔条,在孔架中。每个孔都涂有亲和纯化的抗白蛋白抗体。
7. 白蛋白校准品
一瓶含有冻干的白蛋白校准品。本试剂盒中使用的校准品为人源。它用纯化的狨猴白蛋白定量,并与之表现一致。使用人源标准允许此试剂盒的出口。
试剂准备
1. 稀释液浓缩液
提供的稀释液是5倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩液,4份dH2O)稀释1:5。
2. 洗涤液浓缩液
提供的洗涤液是20倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩液,19份dH2O)稀释1:20。当储存温度较低时,浓缩液中出现晶体并不罕见。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。
3. 酶-抗体结合物
通过向每个微孔板测试条添加10微升酶-抗体结合物至990微升1倍稀释液中,计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀但轻柔地混合。避免起泡。
4. 显色底物溶液
按供应状态直接使用。
5. 终止液
按供应状态直接使用。
6. 抗白蛋白ELISA微孔板
按供应状态直接使用。揭开微孔板袋封口,从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有条和孔,放回袋中并重新密封,并与干燥剂一起存放。
7. 白蛋白校准品
向白蛋白校准品中加入1.0毫升蒸馏或去离子水,轻轻混合直至溶解。校准品现在的浓度为390微克/毫升(如果打算将来使用,应分装并冷冻重悬的校准品)。白蛋白标准品需要在立即使用前准备(见下表)。每步之间充分混合。避免起泡。
结果:
1. 从每个样品的测试值中减去平均背景值。
2. 使用标准观察到的结果构建标准曲线。适当的曲线拟合是四参数逻辑曲线。也可以使用二阶多项式(二次)或其他曲线拟合。
3. 从标准曲线中插值得到测试样品值。校正血清稀释因子,以得到原始样品中白蛋白的浓度。
程序的局限性:
1. 当完全理解了说明书中的信息,并遵循良好的实验室操作规范时,将获得可靠和可重复的结果。
2. 可能影响测定性能的因素包括仪器的正确功能、玻璃器皿的清洁度、蒸馏水或去离子水的质量、试剂和样品移液的准确性、洗涤技术、孵育时间或温度。
3. 不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合或替换。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。
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