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ALPCO 抗M2(IgG)ELISA检测原理&检测程序详细方案

发布者:艾美捷科技    发布时间:2024-09-23     
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AMA-M2-G是一种使用天然线粒体M2的固相酶免疫测定法用于定量和定性检测人血清中M2抗体的抗原。该检测是诊断原发性胆汁性肝硬化(PBC)的工具。


作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品 抗M2(IgG)ELISA产品仅用于科研,不可用于临床诊断。

产品名称货号详情

抗M2(IgG)ELISA

ALP-35-M2GHU-E01查看


抗M2(IgG)ELISA检测原理:

原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种影响小和中等大小胆管的慢性炎症性疾病,血清学特征是循环中的M2自身抗体的存在。抗M2自身抗体属于抗线粒体抗体(AMA)组。M2亚型的AMA异质性反应特异性是针对α-酮酸脱氢酶复合体的三个相关蛋白,该复合体位于内线粒体膜上。主要识别的表位位于丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)的E2亚基和蛋白X上。此外,AMA-M2-G自身抗体还识别同一复合体的(E1α和E1β)亚基以及多个其他多酶复合体的E2亚基,如2-氧戊二酸脱氢酶复合体(OGDC)和支链2-氧酸脱氢酶复合体(BCOADC)。

确定AMA-M2-G是诊断PBC的有力工具。


试剂盒组成:

需要重新配制的:

5倍样本缓冲液1瓶,20毫升 - 5倍浓缩(白色瓶盖:黄色溶液)

成分:Tris, NaCl, 牛血清白蛋白(BSA), 叠氮化钠 < 0.1%(防腐剂)

50倍洗涤缓冲液1瓶,20毫升 - 50倍浓缩(白色瓶盖:绿色溶液)

成分:Tris, NaCl, 吐温20, 叠氮化钠 < 0.1%(防腐剂)

即用型:

阴性对照1瓶,1.5毫升(绿色瓶盖:无色溶液)

成分:人血清(稀释),叠氮化钠 < 0.1%(防腐剂)

阳性对照1瓶,1.5毫升(红色瓶盖:黄色溶液)

成分:人血清(稀释),叠氮化钠 < 0.1%(防腐剂)

截止校准液1瓶,1.5毫升(蓝色瓶盖:黄色溶液)

成分:人血清(稀释),叠氮化钠 < 0.1%(防腐剂)

校准液6瓶,每瓶1.5毫升,浓度分别为0, 3, 10, 30, 100, 300 U/ml

(颜色随浓度增加而加深:黄色溶液)

成分:人血清(稀释),叠氮化钠 < 0.1%(防腐剂)

结合物1瓶,15毫升IgG(蓝色瓶盖:蓝色溶液)

成分:与辣根过氧化物酶结合的抗人免疫球蛋白

TMB底物1瓶,15毫升(黑色瓶盖)

成分:稳定的TMB/H2O2

停止液1瓶,15毫升(白色瓶盖:无色溶液)

成分:1M盐酸

微孔板12x8孔条,带有可拆卸的微孔

涂覆请参见第1段


检测程序:

1. 移液前的准备

稀释浓缩试剂:

将浓缩样本缓冲液按1:5的比例用蒸馏水稀释(例如20毫升加80毫升)。

将浓缩洗涤缓冲液按1:50的比例用蒸馏水稀释(例如20毫升加980毫升)。

样本:

将血清样本按1:101的比例用样本缓冲液(1倍)稀释

例如:1000微升样本缓冲液(1倍)+ 10微升血清。充分混合!

洗涤:

每8个孔准备20毫升稀释洗涤缓冲液(1倍),或每96个孔准备200毫升

例如:4毫升浓缩液加196毫升蒸馏水。

自动洗涤:

考虑设置仪器和机器人移液器死体积所需的额外体积。

手动洗涤:

将孔中的液体倒空,然后将微孔板倒置在干净的吸水纸上,用力敲击以去除液体。向每个孔中加入300微升稀释洗涤缓冲液,等待20秒。重复整个程序两次。

微孔板:

计算测试所需的孔数。从框架中移除未使用的孔,放回提供的塑料袋中,与干燥剂一起密封(2-8°C/35-46°F)。

工作流程

有关移液方案,请参见附录A,有关测试程序,请参见附录B

我们建议对样本和校准液进行双重移液。

截止校准液仅用于定性测试。

● 将100微升每位患者的稀释血清移入指定的微孔中。

● 将100微升校准液或截止校准液以及阴性和阳性对照移入指定的孔中。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分钟。

● 用300微升稀释洗涤缓冲液(1:50)洗涤3次。

● 向每个孔中加入100微升结合物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分钟。

● 用300微升稀释洗涤缓冲液(1:50)洗涤3次。

● 向每个孔中加入100微升TMB底物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下,避免强烈光线照射,孵育30分钟。

● 按照加入底物的相同顺序,向每个孔中加入100微升停止液。

● 孵育至少5分钟。

● 轻轻摇动板子5秒钟。

● 在30分钟内读取450纳米(可选450/620纳米)处的吸光度。


文献参考:

1.BergPA,KleinR(1989).Heterogeneityofantimitochondrialantibodies.Seminarsinliverdisease9:103-116.

2.Berg,P.A.,Klein,R.,Lindenborn-Fotinos,J.,Kl?ppel,G.(1982).ATPaseassociatedantigen(M2):markerantigenforserologicaldiagnosisofprimary biliarycirrhosis.Lancet2:1423-1426.

3.MannsM,MeyerzumBüschenfeldeK-H(1989).Prim?rebili?reZirrhose.In:HepatologieundPraxis,MeyerzumBüschenfeldeK-H,ArnoldW,HüttenrothTHeds.GeorgThiemeVerlagstuttgart,NewYork,350-358.

4.CoppelRL,GershwinME(1995).Primarybiliarycirrhosis:Themoleculeandthemimic.ImmunologicalReviews44:17-49.


ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。


作为ALPCO在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。


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