预成型肌动蛋白丝：兔骨骼肌来源的高可靠性体外实验底物

产品概述

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的预成型肌动蛋白丝（Pre-formed actin filaments，PAFs）（货号：AKF99）由纯度大于99%的兔骨骼肌肌动蛋白（Cat. AKL99）制备而成，货号AKF99。该产品以冻干粉形式提供，便于储存和运输。每批产品均经过严格的质量控制，确保在需要肌动蛋白丝底物的实验中具有高度可靠性和重现性。其平均丝长为8 ?m，可在不同实验中提供一致的性能表现。

应用范围

体外肌球蛋白ATP酶激活的底物

肌球蛋白抑制剂IC50的测定

高通量筛选（HTS）应用

肌动蛋白结合蛋白（ABPs）的体外发现与表征

产品优势

即用型底物： PAFs无需自行聚合，复溶后即可直接用于实验，显著节省实验准备时间，特别适合高通量筛选和需要快速启动的实验流程。

高批次一致性： 在肌动蛋白丝激活的肌球蛋白ATP酶实验中，PAFs可产生高度一致的结果。样本间Vmax的变异系数（CV）小于5%，不同批次间CV小于8%，确保实验数据的可靠性和可比性。

严格质控： 通过分析聚合质量和激活肌球蛋白ATP酶的能力评估生物活性。严格的质量控制确保超过85%的肌动蛋白以丝状形式存在，且肌球蛋白ATP酶活性相比单独的肌球蛋白或肌动蛋白对照组至少被刺激十倍以上。

纯度

PAFs由AKL99肌动蛋白蛋白制备。AKL99为纯度大于99%的α-骨骼肌肌动蛋白。纯度通过12%聚丙烯酰胺凝胶考马斯蓝染色蛋白的扫描光密度法测定，污染物主要为肌动蛋白二聚体和α-辅肌动蛋白。

储存与复溶

冻干粉储存： 冻干蛋白在4°C、干燥条件（湿度<10%）下可稳定保存6个月。

复溶方法： 用2.4 ml室温Milli-Q水复溶至0.4 mg/ml浓度。复溶后缓冲液组成为：5 mM Tris-HCl pH 8.0、0.2 mM CaCl2、0.2 mM ATP、2 mM MgCl2、5%（w/v）蔗糖。

储存条件：

丝状体可在4°C保存1周。

或分装为<100 ul样品，液氮速冻后储存于-70°C，可稳定保存6个月。

37°C水浴快速解冻，避免超过一次冻融循环。

稀释方法： 使用5 mM Tris-HCl pH 8.0、0.2 mM ATP和2 mM MgCl2或0.2 mM CaCl2进行稀释。

生物活性检测所需试剂

1. 兔肌肉肌动蛋白预成型丝（Cat. AKF99）

2. 兔骨骼肌肌球蛋白（Cat. MY02）

3. 反应缓冲液（冰预冷15 mM Tris-HCl pH 7.5、25 mM KCl、10 mM MgCl2、0.1 mM EGTA）

4. ATP，100 mM溶液（Cat. BSA04），取20 ?l稀释至500 ul冰预冷15 mM Tris-HCl pH 7.5中，配制成4 mM溶液。

使用注意事项

复溶后尽快使用，避免反复冻融。

解冻时使用37°C水浴快速解冻，切勿加热或剧烈涡旋。

稀释时请使用指定缓冲液，以维持丝状结构的稳定性。

本产品仅用于科研用途。

总结

预成型肌动蛋白丝AKF99以>99%的纯度、>85%的丝状体比例、8 ?m的平均丝长以及优异的批次一致性，成为肌球蛋白ATP酶活性检测、肌球蛋白抑制剂筛选及肌动蛋白结合蛋白研究的理想底物。其即用型冻干粉形式和严格的质量控制体系，为高通量筛选和精准体外实验提供了可靠保障。

文献参考

1. Pardee J.D., and Spudich, J.A. 1982. Methods in Cell Biol.24:271-288.

2. Gordon D.J. et al. 1977. JBC, 252, 8300-8309.