创新光谱+交叉吸附：Jackson AF 555/568 标记二抗，照亮多靶点免疫荧光高分辨成像之路

Jackson ImmunoResearch推出的Alexa Fluor 555和568标记二抗，通过创新的光谱设计与严格交叉吸附工艺，彻底革新了多靶点免疫荧光实验的可行性。这两款染料填补了传统橙色通道（550-600 nm）的空白，与DAPI（核染色）、Alexa Fluor 488（绿色）、647（远红外）形成 “黄金四色组合” ，实现了细胞亚结构的高分辨率同步成像。

在生命科学和医学研究中，荧光标记技术一直是不可或缺的工具。无论是细胞成像、蛋白质相互作用研究，还是流式细胞术，荧光染料的性能直接决定了实验的成败。今天，我们要为大家介绍两款备受瞩目的荧光染料——AF 555和AF 568，它们来自全球知名的抗体和荧光染料供应商Jackson ImmunoResearch。

什么是AF 555和AF 568？

AF 555和AF 568是两种高性能的荧光染料，属于Alexa Fluor系列。它们以其卓越的光稳定性、高量子产率和优异的荧光强度而闻名。这些特性使得它们在多重荧光标记实验中表现出色，尤其是在需要高分辨率和低背景噪声的应用中。

- AF 555：激发波长约为555 nm，发射波长约为565 nm，适合绿色到橙色的荧光通道。

- AF 568：激发波长约为568 nm，发射波长约为580 nm，适合橙色到红色的荧光通道。

这两种染料可以与抗体、蛋白质、核酸等生物分子共价结合，广泛应用于免疫荧光、流式细胞术、超分辨率显微镜等领域。

为什么选择AF 555和AF 568？

1. 卓越的光稳定性  

在长时间成像实验中，光漂白是一个常见问题。AF 555和AF 568具有优异的光稳定性，能够在高强度激光照射下保持荧光信号，确保实验结果的可靠性。

2. 高量子产率  

量子产率是衡量荧光染料效率的重要指标。AF 555和AF 568的高量子产率意味着它们能够将更多的激发光转化为荧光信号，从而提高检测灵敏度。

3. 宽光谱范围  

这两种染料的激发和发射光谱范围较宽，能够与多种激光器和滤光片兼容，非常适合多重荧光标记实验。

4. 低背景噪声  

AF 555和AF 568的荧光信号与背景噪声比（信噪比）极高，这使得它们在低表达目标检测中表现出色。

 应用场景

1. 免疫荧光染色  

在免疫荧光实验中，AF 555和AF 568可以与一抗或二抗结合，用于标记细胞或组织中的特定抗原。它们的高亮度和光稳定性使得成像结果更加清晰。

2. 流式细胞术  

在流式细胞术中，AF 555和AF 568可以用于标记细胞表面或内部的分子，帮助研究人员分析细胞群体的异质性。

3. 超分辨率显微镜  

超分辨率显微镜技术（如STED、PALM/STORM）需要高亮度和光稳定性的荧光染料。AF 555和AF 568是这些技术的理想选择。

4. 多重标记实验  

由于AF 555和AF 568的光谱特性与其他Alexa Fluor染料（如AF 488、AF 647）兼容，它们可以用于多重标记实验，同时检测多个目标分子。

核心优势：

1. 光谱无干扰：AF555（Ex552/Em572）与AF568（Ex577/Em602）的激发/发射峰间距优化至25-30 nm，显著降低通道间串扰。

2. 交叉吸附工艺：所有二抗经过驴/山羊宿主来源的严格吸附处理，消除与常见物种（如小鼠、兔、大鼠）抗体的非特异性结合。

3. 光稳定性提升：对比传统Cy染料（如Cy3/Cy5），Alexa Fluor系列光漂白抗性提高3-5倍，适合长时间活细胞成

Alexa Fluor染料的光谱特性：

实际应用案例与性能验证

人上皮细胞（HEp-2）四色成像

· 靶标组合：DAPI（核）、AF488-Ki67（增殖）、AF555-α微管蛋白（细胞骨架）、AF647-GM130（高尔基体）。

· 结果：

o 分辨率提升40%：细胞器边界清晰度显著优于传统TRITC染料（图2）。

o 信噪比提升25-30%：AF555/568的量子产率（Φ=0.69）高于同类染料，适合低丰度蛋白检测。

可与DAPI结合用于四色免疫荧光的有用染料组合是Alexa Fluor 488、568和647。图中展示了这种颜色组合在人类上皮细胞（HEp-2）中的应用，这些细胞被染色以显示常见的细胞蛋白标记物。Ki-67蛋白（细胞增殖的标志物）以绿色显示。细胞骨架结构的某些部分以黄色显示，这是通过使用抗α-微管蛋白抗体染色微管来检测异二聚体纤维的结果。细胞间接触通过染色上皮细胞标志物E-钙黏蛋白来可视化，它以红色显示，与黄色的微管并列。细胞核用DAPI染色，以蓝色显示。

三种Alexa Fluor染料的光谱特性与DAPI核染色结合，实现有效的四色免疫荧光。通过染色人类上皮（HEp-2）细胞中的常见细胞蛋白标记物，展示了这种颜色组合。Ki-67蛋白是细胞增殖的标记物，在绿色中可见。细胞骨架结构的某些方面在黄色中可见，通过使用抗α微管蛋白染色微管来检测异二聚体纤维。参与高尔基体堆叠和结构维持的高尔基体基质蛋白，使用抗人GM130/GOLGA2染色，在细胞核边缘呈红色可见。细胞核使用DAPI染色，呈蓝色。

产品选择

1. 核心产品列表（部分）

注：完整列表涵盖20+种宿主与抗体类型，支持IgG/IgM/IgA等亚型。

与传统技术的对比优势

温馨小贴士Tips：

1. 优化抗体标记比例  

为了获得最佳的荧光信号，建议优化抗体与染料的标记比例。通常，每个抗体分子标记3-6个染料分子效果最佳。

2. 选择合适的滤光片  

确保显微镜或流式细胞仪的滤光片与AF 555和AF 568的激发和发射光谱匹配，以获得最强的荧光信号。

3. 避免长时间光照  

尽管AF 555和AF 568具有优异的光稳定性，但仍建议尽量减少样品在强光下的暴露时间，以延长荧光信号的寿命。

Jackson ImmunoResearch是全球领先的抗体和荧光染料供应商，专注于为生命科学研究提供高质量的产品和技术支持。其产品线涵盖二抗、荧光染料、标记试剂盒等，广泛应用于免疫学、细胞生物学、分子生物学等领域。