iFluor 488-麦胚凝集素(WGA)结合物：明亮、光稳定的iFluor染料标记的偶联物

发布者：艾美捷科技发布时间：2024-12-30

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小麦胚芽凝集素（Wheat Germ Agglutinin, WGA）是一种最初从小麦（Triticum vulgare）中提取的糖类结合凝集素。与其他凝集素，如美洲商陆凝集素A（Concanavalin A, ConA）一样，WGA对细胞表面和细胞内糖结合物（例如，糖蛋白和糖脂）上常见的特定糖残基表现出高亲和力。这种特异性常被用于荧光成像和分析技术中，以标记真核细胞的质膜、革兰氏阳性细菌和酵母芽痕，染色纤维性瘢痕组织，以及在凝胶中定位和检测糖基化蛋白。荧光WGA偶联物，包括那些用明亮、光稳定的iFluor?染料标记的偶联物，为设计共定位和其他多色实验提供了更大的灵活性，用于成像和流式细胞术。

小麦胚芽凝集素的性质

小麦胚芽凝集素选择性地结合到糖结合物和整个细胞表面发现的寡糖上的N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和N-乙酰神经氨酸（唾液酸）残基。这些残基的存在和分布不仅在不同细胞和细胞器类型之间有所不同，而且在各种病理状态下可能异常表达，使WGA成为识别和分析这些表型的有用标记。WGA是水溶性的，在溶液中主要以分子量约为38 kDa的异二聚体形式存在。在生理条件下，WGA是阳离子性的（等电点>9），无法穿透活细胞。在用荧光WGA偶联物染色以检测细胞内糖结合物和寡糖之前，必须固定细胞和组织样本。

当WGA用琥珀酸酐琥珀酰化时，其在中性pH下的溶解度增加了100倍，并且可以用最低浓度2 ?g/mL使兔子和人类红细胞（A、B和O血型）凝集。像未修饰的WGA一样，琥珀酰化的WGA对GlcNAc残基具有特异性。然而，它失去了对唾液酸残基的结合亲和力，这表明两种凝集素可以作为区分N-乙酰葡萄糖胺化和唾液酸化糖结合物的系统。

荧光WGA偶联物通常用于成像和流式细胞术中，以定位和检测细胞表面或细胞内的糖结合物。它们有助于根据糖蛋白组成识别细胞类型，并且用于标记真核细胞壁、纤维性瘢痕组织、酵母芽痕、甲壳质和细菌细胞壁肽聚糖。后者已用于区分革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。

艾美捷iFluor 488-麦胚凝集素(WGA)结合物：

货号 AAT-25530

单位大小：1毫克

溶剂：水

校正因子（260纳米）：0.21

校正因子（280纳米）：0.11

消光系数（cm -1 M -1）：75000

激发（纳米）：491

发射（纳米）：516

量子产率：0.9

预期用途仅供研究使用（RUO）

储存条件：冷冻（<-15°C）；尽量减少光照

荧光iFluor-WGA偶联物：

AAT Bioquest提供多种荧光颜色的iFluor-WGA偶联物，从深蓝色到近红外波长，特别是AAT Bioquest的绿色荧光iFluor 488、红色荧光iFluor 594和远红色荧光iFluor 647-WGA偶联物。这些偶联物与其相应的FITC、Texas Red和Cy5对应物的光谱几乎相同，但在更宽的pH范围（pH 4至10）内提供了明显更亮、更稳定的荧光信号。发射峰值在670 nm的长波长iFluor 647-WGA偶联物，在多色成像或处理已知具有高固有自发荧光的样本（如组织）时提供了显著的优势。iFluor 647的荧光发射与常用的蓝色和绿色荧光染料的发射很好地分离，消除了补偿的需要。

AAT Bioquest还提供几种用AAT Bioquest的Alexa Fluor XFD等效物标记的WGA偶联物，包括广泛使用的Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 594染料等。所有XFD染料与Alexa Fluor替代品具有完全相同的化学结构。

库存溶液的准备：

除非另有说明，所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融循环。

iFluor 488-小麦胚芽凝集素（WGA）偶联物库存溶液（200X）

将500 ?L的去离子水加入粉末中，制成2 mg/mL的库存溶液。

注意：重组的偶联溶液可以储存在2-8°C进行短期储存，或在-20°C进行长期储存。

工作溶液的准备：

iFluor 488-小麦胚芽凝集素（WGA）偶联物工作溶液（1X）

将5 ?L的200X WGA偶联溶液加入1 mL的HHBS缓冲液中。

注意：不同细胞系的优化染色浓度可能不同。推荐的起始浓度为活细胞的5-10 ?g/mL。

样品实验协议：

在打开前将瓶加热至室温并短暂离心。染色协议因应用而异。应通过实验确定偶联物的适当稀释度。