鬼笔环肽-iFluor 488偶联物，更高分辨率、更详细的染色

Phalloidin偶联物以高亲和力染色固定和渗透细胞中的F-actin。

Phalloidin是一种从毒死帽蘑菇鹅膏菌中分离出来的双环七肽。其对丝状肌动蛋白（F-actin）与单体G-肌动蛋白之间的凹槽的高结合亲和力被广泛用于在组织切片、细胞培养或无细胞制剂中可视化和定量F-actin。与肌动蛋白特异性抗体相比，鬼笔环肽的非特异性结合可以忽略不计，从而在细胞成像过程中提供最小的背景和高对比度。一旦与F-actin结合，鬼笔环肽就会将单体和细丝的平衡向细丝侧移动，并抑制ATP水解。这种相互作用通过防止亚基解离来稳定肌动蛋白丝，并通过降低临界浓度来促进肌动蛋白聚合。

当与荧光染料结合时，鬼笔环肽可以以纳摩尔浓度用于标记和可视化固定和渗透细胞、细胞培养和无细胞实验中的F-actin，以及甲醛固定和渗透组织切片。Phalloidin偶联物对所有类型和大小的肌动蛋白丝表现出相似的亲和力，在肌肉和非肌肉细胞中以1:1的化学计量比（phallotoxin:肌动蛋白）结合。与抗体相比，鬼笔环肽衍生物很小（<2kDa），与鬼笔环蛋白结合的细丝不会阻碍细丝的功能特性。小尺寸也允许更密集的F-actin标记，在更高分辨率下成像时产生更详细的染色。此外，由于肌动蛋白在进化上是保守的，鬼笔环肽衍生物的结合特性可用于染色各种动物和植物细胞。

艾美捷鬼笔环肽-iFluor 488偶联物：

货号 AAT-23115

偶联物：iFluor 488

单位大小：300次测试

分子量：~1400

溶剂：DMSO

预期用途 仅供研究使用（RUO）

储存：冷冻（<-15°C）；尽量减少光照

校正因子（260纳米）：0.21

校正因子（280纳米）：0.11

消光系数（cm -1 M -1）：75000

激发（纳米）：491

发射（纳米）：516

量子产率：0.9

协议概要：

在微孔板孔中准备样品

从板中的样品中移除液体

加入Phalloidin-iFluor? 488偶联溶液（每孔100 μL）

在室温下对细胞进行20至90分钟的染色

洗涤细胞

在显微镜下使用FITC滤光片检查样本

重要事项     在打开前将瓶加热至室温并短暂离心。

储存和处理条件：

如果储存在-20°C，溶液至少稳定6个月。保护荧光偶联物不受光线影响，并避免冻融循环。

注意     Phalloidin有毒，尽管一瓶中的毒素量可能只对蚊子致命（Phalloidin的LD50 = 2 mg/kg），应小心处理。

工作溶液的准备：

Phalloidin-iFluor? 488偶联工作溶液

将1 μL的Phalloidin-iFluor? 488偶联溶液加入到含1% BSA的PBS中。

注意     Phalloidin偶联物的库存溶液应分装并储存在-20°C，避免光线照射。

注意     不同细胞类型可能染色不同。应相应准备Phalloidin偶联工作溶液的浓度。

样品实验协议：

染色细胞

进行甲醛固定。在室温下，将细胞与PBS中的3.0-4.0%甲醛一起孵育10-30分钟。

注意：避免使用任何含有甲醇的固定剂，因为甲醇可能会在固定过程中破坏肌动蛋白。首选的固定剂是无甲醇的甲醛。

用PBS冲洗固定的细胞2-3次。

可选：将0.1% Triton X-100加入PBS中，用于固定细胞3至5分钟以增加通透性。用PBS冲洗细胞2-3次。

在固定的细胞中加入100 μL/孔（96孔板）的Phalloidin-iFluor? 488偶联工作溶液，并在室温下对细胞进行20至90分钟的染色。

在将细胞板封盖和在显微镜下使用FITC滤光片组进行成像之前，用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以去除多余的Phalloidin偶联物。

图：使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜（绿色）对用Phalloidin iFluor?488共轭物染色的HeLa细胞的荧光图像。将细胞固定在4%甲醛中，用线粒体染料MitoLite?Red FX600（Cat#2677，红色）和Nuclear Blue?DCS1（Cat#17548，蓝色）共标记。