Cy5.5 单琥珀酰亚胺酯荧光染料（与Cy5.5 NHS酯化学等效）兼顾细胞分析与动物实验需求

一、产品概述

Cy5.5 NHS 酯（Cyanine-5.5 NHS ester）是一种远红外荧光染料，属于菁染料家族中光谱位置介于 Cy5 与 Cy7 之间的重要成员。Cyanine 5.5 monosuccinimidyl ester [equivalent to Cy5.5? NHS ester]由艾美捷代理AAT Bioquest推出，货号：AAT-174。该试剂通过 NHS 酯官能团与生物分子上的伯胺基团发生共价偶联，广泛应用于多肽、蛋白质及寡糖等生物分子的荧光标记，是红色荧光区域中最常用的染料类型之一。

二、光谱定位与应用优势

染料 | 激发峰 | 发射峰 | 光谱区域

Cy5 | 651 nm | 670 nm | 远红外

Cy5.5 |约 675 nm |约 694 nm |远红外（偏近红外）

Cy7 | 756 nm | 779 nm | 近红外

Cy5.5 的发射波长位于约 694 nm，处于远红外向近红外过渡的区域。相较于可见光区染料，其组织穿透能力更强，生物组织自发荧光背景更低；相较于 Cy7，其发射波长与常规 CCD 相机和荧光显微镜的检测效率匹配度更高，且与 Cy5 滤光片组有一定兼容性，适合作为多色成像中的中间通道。

三、产品形式与溶解性优势

AAT Bioquest 提供的 Cy5.5 NHS 酯采用三乙铵盐（triethylammonium salt）形式，而非部分品牌使用的钾盐形式。两种盐形式的核心对比如下：

盐形式 | 溶解性特点

三乙铵盐 | 在 DMSO 和 DMF 中溶解度更高，复溶顺畅

钾盐 | 溶解度相对较低，复溶难度略大

三乙铵盐在反应活性和标记产物性能上与钾盐完全一致，但改善的溶解性意味着更稳定的储备液配制、更准确的工作浓度控制，以及更少的溶剂操作误差。

四、标记反应要点

NHS 酯与伯胺的偶联反应推荐在 pH 8.0–8.5 的缓冲液中进行。操作时需注意：

-避免使用含 Tris、甘氨酸等伯胺类缓冲剂（会竞争消耗染料）

-标记完成后需计算标记度，避免过度标记导致自淬灭

-未反应染料可通过脱盐柱或透析去除

五、典型应用场景

-多色免疫荧光：与 FITC、Cy3、Cy5 组成四色标记方案，覆盖可见光至远红外区域

-活体成像：波长适中，兼顾组织穿透与检测设备兼容性

-流式细胞术：适配配备远红外激光器（约 640 nm）的流式细胞仪

综上，Cy5.5 NHS 酯凭借其光谱中间位置带来的平衡性优势、优化的三乙铵盐形式以及稳定的标记化学，是多色荧光成像和活体研究中可靠的远红外标记工具。

文献参考：
Excitation of Cy5 in self-assembled lipid bilayers using optical microresonators

Authors: Freeman LM, Li S, Dayani Y, Choi HS, Malmstadt N, Armani AM.

Journal: Appl Phys Lett (2011): 143703

Theranostic cRGD-BioShuttle Constructs Containing Temozolomide- and Cy7 For NIR-Imaging and Therapy

Authors: Wiessler M, Hennrich U, Pipkorn R, Waldeck W, Cao L, Peter J, Ehemann V, Semmler W, Lammers T, Braun K.

Journal: Theranostics (2011): 381

Rational approach to select small peptide molecular probes labeled with fluorescent cyanine dyes for in vivo optical imaging

Authors: Berezin MY, Guo K, Akers W, Livingston J, Solomon M, Lee H, Liang K, Agee A, Achilefu S.

Journal: Biochemistry (2011): 2691

In vivo detection of embryonic stem cell-derived cardiovascular progenitor cells using Cy3-labeled Gadofluorine M in murine myocardium

Authors: Adler ED, Bystrup A, Briley-Saebo KC, Mani V, Young W, Giovanonne S, Altman P, Kattman SJ, Frank JA, Weinmann HJ, Keller GM, Fayad ZA.

Journal: JACC Cardiovasc Imaging (2009): 1114

Quantitative proteomics by fluorescent labeling of cysteine residues using a set of two cyanine-based or three rhodamine-based dyes

Authors: Volke D, Hoffmann R.

Journal: Electrophoresis (2008): 4516