山羊抗小鼠IgG-Fc片段抗体亲和纯化，适用于多重免疫检测与免疫沉淀后WB检测，无轻链干扰

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的山羊源多克隆抗体（货号：A90-131A），特异性靶向小鼠IgG的Fc片段。经抗原亲和纯化及固相吸附处理，确保对小鼠IgG重链Fc区的特异性识别，与轻链（Fab）及IgA、IgM的交叉反应可忽略不计。以完整IgG形式提供，适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）和蛋白质印迹（WB）等检测平台。本品浓度为1 mg/ml，是免疫检测体系中理想的一抗或二抗替代工具。

靶点背景：小鼠IgG与Fc片段的功能意义

IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，在体液免疫应答中发挥核心作用。其分子结构由两条重链和两条轻链组成，可酶解为Fab片段（抗原结合）和Fc片段（效应功能）。

Fc片段的生物学功能：

与Fc受体结合，介导调理吞噬、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性（ADCC）

激活补体经典途径（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3亚型）

决定抗体在体内的半衰期（通过与FcRn受体的结合）

抗Fc抗体的应用价值：

特异性识别IgG重链恒定区，不识别轻链或Fab区

适用于检测变性条件下（WB）的IgG分子

可区分完整IgG与游离轻链或Fab片段

在多重染色实验中，可配合Fab特异性二抗使用，避免交叉识别

抗体特性规格

参数 规格

靶点 小鼠IgG-Fc片段

宿主 山羊

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

同种型 IgG

偶联物 非偶联

纯度 抗原亲和纯化

浓度 1 mg/ml

抗原物种 小鼠

反应性 小鼠（经验证）

特异性验证：

经免疫电泳和ELISA验证，该抗体特异性识别小鼠IgG

与小鼠IgA、IgM的交叉反应可忽略不计

可能与其他物种的IgG发生交叉反应（需预实验验证）

储存与稳定性

储存温度：2-8°C（请勿冷冻）

有效期：自收货之日起2年（较常规抗体更长）

缓冲液：磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮钠

> 注意：叠氮钠作为防腐剂。本品有效期为2年，请勿冷冻。若需长期保存，可考虑分装后-80°C冷冻，但反复冻融会影响活性。原厂建议2-8°C保存即可满足2年稳定性。

应用方法与实验条件

适用技术平台与推荐稀释度

应用 推荐稀释度 说明

ELISA 1:1000 - 1:30,000 包被板用：1:100 - 1:500

免疫细胞化学（ICC） 1:200 - 1:2,000 适用于细胞爬片或培养细胞染色

免疫组织化学（IHC） 1:200 - 1:2,000 适用于冷冻切片或FFPE切片

蛋白质印迹（WB） 1:1000 - 1:30,000 检测膜上小鼠IgG（变性/还原条件）

重要提示：

并非所有列出的应用均经过生产厂商实验室的专门测试，建议使用者在实验前进行预实验优化。

上述稀释度范围为通用指南，具体最佳稀释度需根据样本丰度、检测体系（化学发光、显色或荧光）自行确定。

蛋白质印迹（WB）详细指南

原理：本抗体识别变性/还原条件下的小鼠IgG重链（Fc部分），适用于检测免疫沉淀中的小鼠一抗、小鼠血清样本或小鼠单克隆抗体的表达。

推荐流程：

一抗稀释：1:1000 - 1:30,000（建议从中值1:10,000开始）

封闭液：5%脱脂牛奶-TBST或3% BSA-TBST

一抗孵育：4°C过夜或室温2小时

二抗：使用HRP标记的抗山羊IgG二抗（如免抗山羊-HRP）

检测：化学发光或显色底物

预期条带：

还原条件下：小鼠IgG重链约55 kDa，轻链约25 kDa（本抗体仅识别重链）

非还原条件下：完整IgG约150 kDa

注意：若用于检测IP产物中的小鼠IgG一抗（重链），本抗体可直接识别重链，无需使用轻链特异性二抗来避免干扰。但若需同时检测目标蛋白（与一抗同物种），仍需注意信号叠加。

ELISA详细指南

两种使用模式：

1. 作为检测抗体（夹心ELISA中检测小鼠IgG）：

稀释度：1:1000 - 1:30,000

配合HRP标记的抗山羊IgG二抗使用，或使用本抗体直接标记HRP（但本产品为非偶联型）

2. 作为包被抗体（捕获小鼠IgG）：

稀释度：1:100 - 1:500

用碳酸盐包被缓冲液（pH 9.6）稀释，4°C过夜包被

质控建议：使用已知浓度的小鼠IgG标准品建立标准曲线，确定本抗体的最佳工作稀释度。

免疫组织化学（IHC）与免疫细胞化学（ICC）

原理：用于检测组织切片或细胞样本中内源性小鼠IgG（如浆细胞、免疫复合物沉积）或外源性注射的小鼠抗体。

稀释范围：1:200 - 1:2,000

样本处理：

IHC：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片需进行抗原修复（推荐柠檬酸缓冲液pH 6.0或EDTA缓冲液pH 8.0），冷冻切片无需修复。

ICC：细胞爬片经4%甲醛固定后，需用0.1-0.5% Triton X-100透化。

检测系统：使用HRP/AP标记的抗山羊IgG二抗，配合DAB或AEC显色；或使用荧光标记二抗进行免疫荧光。

阳性对照：小鼠脾脏或淋巴结组织切片（含有浆细胞）或已知注射了小鼠抗体的小鼠组织。

物种交叉反应性说明

本品针对小鼠IgG-Fc制备，经ELISA验证与小鼠IgA、IgM无显著交叉。但由于Fc区在不同物种免疫球蛋白之间存在同源性，本抗体可能与其他物种的IgG发生交叉反应，包括但不限于：

大鼠IgG

兔IgG（部分）

人IgG（部分，尤其是IgG亚类）

牛IgG

建议：若用于非小鼠样本，务必设置适当的阴性对照（如不加入一抗、使用同型对照或使用预吸附抗体）。对于需要高物种特异性的实验（如检测人样本中的小鼠抗体），建议选择经过专门吸附的交叉反应更低的二抗。

本品为山羊源亲和纯化多克隆抗体，以Fc片段特异性和长达2年的稳定期为突出优势，适用于WB、ELISA、IHC和ICC四大应用平台。其广谱的稀释范围和可忽略的IgA/IgM交叉反应，使其成为检测小鼠IgG的理想工具。建议使用者根据具体实验体系优化稀释度，并注意物种交叉反应的可能性。若需要用于人源样本，建议使用经过人血清蛋白吸附的版本，或通过预实验确认无背景。