兔抗ACSL4/FACL4抗体亲和纯化，助力铁死亡与脂质代谢研究中的蛋白检测

一、ACSL4 的生物学功能与研究价值

ACSL4（acyl-CoA synthetase long-chain family member 4），又称 FACL4（fatty-acid-Coenzyme A ligase, long-chain 4），是长链脂肪酸辅酶 A 连接酶家族的成员之一。该家族各同工酶在底物特异性、亚细胞定位及组织分布上存在差异，但共同功能是将游离长链脂肪酸转化为脂肪酰辅酶 A 酯，从而在脂质生物合成及脂肪酸降解中发挥关键作用。

ACSL4 的一个显著特征是优先利用花生四烯酸（arachidonate）作为底物。近年来的研究表明，ACSL4 在铁死亡（ferroptosis）中扮演核心角色：它通过促进含多不饱和脂肪酸的磷脂合成，为铁死亡所需的脂质过氧化提供底物。ACSL4 的缺失或抑制可显著阻断铁死亡的发生。此外，该酶的缺乏与智力障碍及 Alport 综合征相关（NCBI Entrez Gene ID: 2182）。

由于 ACSL4 在脂质代谢、铁死亡、神经发育及肾脏疾病中的关键作用，特异性检测 ACSL4 蛋白表达水平的抗体成为相关研究领域的重要工具。由艾美捷Bethyl Laboratories 推出的 ACSL4/FACL4 多克隆抗体（货号 A305-358A）正是针对人 ACSL4 蛋白设计的高亲和力抗体，适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）应用。

二、抗体产品规格与技术参数

2.1 基本特性

参数 说明|

靶标 ACSL4 / FACL4

反应性 人（Human）

应用 IP, WB

宿主 兔（Rabbit）

克隆性 多克隆

形式 完整 IgG

同型 IgG

偶联物 未偶联

浓度 1000 ?g/ml (1 mg/ml)

纯化方式 抗原亲和纯化

抗原种属 人

2.2 免疫原与表位信息

本抗体的免疫原对应人 ACSL4 蛋白（Uniprot ID: O60488）第 250 至 300 位氨基酸之间的区域。该表位位于蛋白的中间区域，具有高度特异性。

抗原编号：按照 O60488.2 中的编号体系，表位位于残基 250 至 300 之间

基因 ID：2182

亲和纯化：抗体通过固定在固相载体上的 ACSL4 特异性表位进行亲和纯化，确保高特异性和低背景

2.3 缓冲液与储存条件

参数 说明

缓冲液 Tris-柠檬酸/磷酸盐缓冲液，pH 7-8

防腐剂 0.09% 叠氮化钠（Sodium Azide）

储存温度 2 - 8 °C（冷藏，不可冷冻）

保质期 自收货之日起 1 年

重要说明：本产品不含甘油，应储存于 2-8°C，切勿冷冻。冷冻可能导致抗体变性或聚集，影响性能。叠氮化钠作为防腐剂可防止微生物污染，但进行细胞培养实验或体内应用时需注意去除。

2.4 浓度测定方法

抗体浓度采用比尔定律（Beer’s Law）测定，其中 1 mg/mL IgG 在 280 nm 处的吸光值为 1.4。本批次抗体浓度为 1000 ?g/ml（即 1 mg/ml）。

三、应用方法与推荐稀释比例

本抗体经验证可用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）。以下为推荐的操作参数和条件。

3.1 免疫印迹（Western Blot）

推荐稀释范围：1:2,000 ~ 1:10,000

封闭与抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST（含 0.1% Tween-20 的 Tris 缓冲盐水）

一抗孵育条件：4°C 过夜（推荐）

检测二抗：山羊抗兔 IgG 重链+轻链抗体（货号 A120-101P）

3.2 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物总蛋白

操作流程：将抗体与蛋白裂解液共孵育（通常 4°C 旋转孵育 2 小时至过夜），然后加入 Protein A 或 Protein G 琼脂糖 beads 捕获免疫复合物，洗涤后洗脱进行 WB 检测。

示例：若使用 1 mg 总蛋白的裂解液，则加入 6 ?l 本抗体（浓度 1 mg/ml）。

3.3 阳性与阴性对照建议

阳性对照：高表达 ACSL4 的人源细胞系（如人胚胎肾细胞 HEK293、人肝癌细胞 HepG2、人宫颈癌细胞 HeLa）。已知 ACSL4 在多种癌细胞系中表达水平较高。

阴性对照：使用等量的兔正常 IgG（非特异性抗体）进行平行 IP，以评估非特异性结合。

四、产品特异性与交叉反应性

本抗体通过抗原亲和纯化，针对 ACSL4 蛋白的独特表位（250-300 位氨基酸）进行富集。该区域在不同物种间的同源性较低，因此抗体主要识别人 ACSL4。对小鼠、大鼠等物种的交叉反应性未经验证，建议用户自行检测或查阅相关文献。

ACSL4 基因存在不同剪接变体，但表位区域在主要亚型中保守。抗体可检测全长 ACSL4 蛋白（预期分子量约 79 kDa）。由于翻译后修饰（如磷酸化、糖基化）或不同亚型，实际检测条带可能在 75-85 kDa 范围内出现单条或双条带，属正常现象。

五、产品功能优势总结

1. 高亲和力与特异性：抗原亲和纯化的多克隆抗体，识别 ACSL4 蛋白内部特异性表位（250-300 aa），经 ELISA 和 WB 验证。

2. 双平台验证：同时适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），满足蛋白表达定量及蛋白-蛋白相互作用研究需求。

3. 提供精确的工作浓度：

IP：6 ?g 抗体/mg 裂解物

WB：1:2,000 - 1:10,000（起始稀释度 1:2,000，可根据信号强度调整）

4. 优化的缓冲体系：Tris-柠檬酸/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），含 0.09% 叠氮化钠，适用于 2-8°C 储存，避免反复冻融。

5. 完整的产品溯源信息：提供免疫原位置（残基 250-300）、Uniprot ID（O60488）、Gene ID（2182），便于用户查阅蛋白结构和功能信息。

6. 附属技术支持：产品说明中明确给出了 IP-WB 检测时避免重链干扰的二抗选择建议（使用抗兔 IgG 轻链 HRP 标记二抗并添加正常猪血清），体现了对实际实验问题的考虑。

六、储存与稳定性

储存于 2-8°C，不可冷冻。若需要长期保存，可分装后置于 2-8°C（但不可低于 0°C）。不建议稀释后储存。

叠氮化钠为防腐剂，对细胞有毒性。若用于细胞培养上清中的免疫沉淀，需注意透析去除或选择无叠氮化物的配方（可咨询定制）。

有效期自收货起 1 年，请在有效期内使用。

七、研究应用场景举例

1. 铁死亡机制研究：检测不同处理（如 erastin、RSL3 诱导）下细胞中 ACSL4 蛋白水平的变化，验证 ACSL4 在铁死亡敏感性中的作用。

2. 脂质代谢调控：研究药物或基因干预对 ACSL4 表达的影响，结合脂质组学分析脂肪酸代谢重编程。

3. 神经系统疾病：分析智力障碍相关基因 MRX63/MRX68 的蛋白产物表达，探索 ACSL4 突变对神经元脂质代谢的影响。

4. 肿瘤生物学：通过 IP-WB 检测 ACSL4 与其他铁死亡相关蛋白（如 GPX4）的相互作用，或评估不同肿瘤组织中 ACSL4 的表达水平与预后的关联。