兔抗BRD3亲和纯化抗体，一抗多用省成本

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品（货号：A302-368A）为针对人BRD3蛋白的兔源多克隆抗体（Whole IgG格式），经抗原亲和纯化，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）检测。BRD3（含溴结构域蛋白3）是一种双溴结构域核蛋白，参与高乙酰化染色质区域的转录调控，与RNA聚合酶II介导的通过核小体的转录延伸密切相关。此外，BRD3与NUT基因的染色体易位融合蛋白已被证实与一种罕见的致死性癌种相关。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | BRD3

反应性 | 人

宿主 | 兔 

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人BRD3蛋白第676位至C末端之间的区域

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 200 ug/ml

存储条件 | 2 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

本抗体识别的表位位于人BRD3蛋白第676至726位氨基酸残基之间（参考编号NP_031397.1，GeneID 8019）。该区域对应BRD3的C末端结构域，与已知的溴结构域功能相关。

抗体通过固相载体上固定的BRD3特异性表位进行亲和纯化，确保高特异性和低背景。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 Western Blot（WB）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 1:10,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 过夜孵育

二抗（细胞裂解液WB） | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB） | 抗兔IgG轻链HRP结合抗体，封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）

特别注意：当对免疫沉淀产物进行WB检测时，建议使用抗兔IgG轻链特异性二抗，以避免与IP中使用的抗体重链（约50 kDa）产生交叉反应。添加5%正常猪血清可进一步降低非特异性背景。

4.2 免疫沉淀（IP）

参数 | 条件

推荐用量 | 6 ug 抗体 / mg 细胞裂解蛋白

该用量经验证可在人细胞裂解液中有效富集BRD3蛋白。实际操作中可根据目标蛋白丰度进行微调，但建议保持总蛋白与抗体比例相对稳定。

4.3 免疫组化（IHC）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:100 1:500

抗原修复 | 推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复

样本类型 | 福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

操作提示：对于FFPE切片，必须进行充分的抗原修复以暴露表位。柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）微波或高压修复效果已验证。建议同时设置阴性对照（兔IgG或未免疫血清）以评估背景染色。

五、存储与稳定性

存储温度：2 8°C，请勿冷冻。反复冻融会降低抗体活性。

保质期：收货后1年内保持稳定。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测（如WB或IHC中直接使用HRP二抗），叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，需通过透析或脱盐柱去除后再使用。

稳定剂：缓冲液中含0.1% BSA，有助于维持抗体在低浓度下的稳定性，减少非特异性吸附。

六、实验应用建议总结

1. 稀释优化：对于初次使用的样本类型，建议在推荐稀释范围（WB 1:2000-1:10000；IHC 1:100-1:500）内进行梯度实验，以获得最佳信噪比。

2. IP注意事项：6 ug/mg裂解液为起始用量，若目标蛋白丰度较低，可适当增加抗体用量至8-10 ug/mg。

3. IHC关键点：必须使用pH 6.0柠檬酸盐修复液；封闭步骤推荐使用与二抗来源匹配的正常血清（如山羊血清），以避免交叉反应。

4. WB二抗选择：检测细胞裂解液时使用常规抗兔IgG（H+L）即可；检测IP产物时必须使用抗兔IgG轻链特异性二抗，避免重链干扰（约50 kDa处）。

5. 阳性对照：建议使用已知高表达BRD3的人细胞系（如HeLa、HEK293）裂解液作为WB阳性对照；IHC可使用扁桃体或睾丸组织作为阳性对照。

本产品适用于人BRD3蛋白的表达检测、蛋白互作研究（IP-WB联合分析）及组织定位研究（IHC），尤其适用于染色质调控、转录延伸及NUT中线癌相关研究领域。