兔抗Raptor抗体亲和纯化赋能细胞生长、代谢与自噬研究

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗体为兔源多克隆抗体（货号：A300-553A），特异性靶向Raptor（mTOR调节相关蛋白）的N末端区域（第1至50位氨基酸）。Raptor是mTORC1复合物的核心组分，该复合物整合生长因子、营养和能量信号，通过磷酸化下游底物S6K和4E-BP1来调控细胞生长、增殖和代谢。抗体经抗原亲和纯化，未偶联标记，适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），且反应种属为人。以下将从基本参数、免疫原信息、应用条件、储存稳定性及生物学背景等方面进行详细说明。

一、关键规格参数

项目 | 详细内容

靶标 | Raptor (Regulatory Associated Protein of mTOR, RPTOR)

反应种属 | 人类

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | 对应人Raptor蛋白第1至50位氨基酸之间的表位（参考序列AAM09075.1，GeneID 57521）

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化（使用固定化的Raptor特异性表位）

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 ?g/mL

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮钠

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

生产流程 | 亲和纯化后，通过Beer定律测定IgG浓度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值为1.4）

> 注：0.09%叠氮钠作为防腐剂，在IP后WB使用HRP标记二抗时需注意叠氮钠会抑制HRP活性。建议在IP洗脱或二抗孵育前充分去除叠氮钠。

二、免疫原与特异性

本抗体的表位定位于人Raptor蛋白的N末端区域（第1至50位氨基酸）。通过固相载体上固定的特异性表位进行亲和纯化，确保抗体识别天然及变性的Raptor。该N末端区域在不同物种间相对保守，但经验证本抗体主要识别人源Raptor，对小鼠反应性未确认（规格中仅标注人）。亲和纯化步骤有效去除了针对其它表位的交叉反应抗体，降低背景。实际实验中建议以阳性对照（如HEK293或HeLa细胞裂解液）确认信号。

三、推荐应用与实验条件

以下稀释度均为起始推荐范围，用户需根据具体实验体系进行优化。

1. 免疫印迹（Western Blot, WB）

稀释度：1:2000 – 1:10,000  

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（Tris缓冲盐水+0.1% Tween-20）  

孵育条件：一抗4°C孵育过夜（推荐）  

二抗推荐：  

常规细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，如货号A120-101P。  

免疫沉淀后WB：为避免变性IP产物中重链（~55 kDa）信号干扰，推荐使用抗兔IgG轻链特异性HRP标记二抗，并在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景。  

阳性对照：HEK293、HeLa或MCF7细胞裂解液。Raptor分子量约为150 kDa，建议使用高分辨率凝胶和充分转膜条件。

2. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗体 / mg总蛋白裂解液  

操作建议：  

裂解液推荐使用非变性裂解缓冲液（如NP-40或Triton X-100体系），避免破坏mTORC1复合物的蛋白-蛋白相互作用。  

孵育条件：4°C旋转孵育2小时或过夜。  

使用Protein A/G琼脂糖或磁珠捕获免疫复合物。  

洗脱后通过WB检测，务必使用抗兔IgG轻链特异性二抗以避免重链干扰。  

阳性对照：过表达Raptor的细胞裂解液或内源性表达较高的细胞（如HEK293、HeLa）。

> 注：本产品未验证用于IHC或ICC-IF，用户需自行探索。

四、产品特性与质量控制

纯化工艺：采用表位特异性亲和纯化，较常规蛋白A/G纯化具有更高的特异性，显著降低非特异性背景。N末端表位的选择避免了与其它mTOR复合物组分（如mLst8、Deptor等）的同源区，提升靶向性。  

浓度与效价：浓度高达1000 ?g/mL，WB推荐稀释比可达1:10,000，经济性良好。  

功能验证：每批抗体均通过WB检测多种细胞裂解液中的内源性Raptor（~150 kDa），确认单一条带位置正确。同时通过IP验证其捕获内源性Raptor及mTORC1复合物的能力。  

批次间一致性：生产记录完整，遵循内部QC标准，符合ISO 9001质量管理体系（母公司Fortis Life Sciences）。  

五、储存与稳定性

储存温度：2–8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、效价下降。  

运输条件：湿冰运输，收货后请立即按上述温度保存。  

分装建议：若需长期使用，建议分装成小份后存放于2–8°C，避免污染。不可稀释后长期储存。  

有效期：自收货之日起1年。过期产品可能信号减弱，建议重新订购。