山羊抗Pumilio 1抗体亲和纯化，双重验证，IP与WB流程优化方案

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对Pumilio 1（PUM1）蛋白的山羊多克隆抗体，货号A300-201A。该抗体可识别人及小鼠来源的Pumilio 1，适用于免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测。抗体经抗原亲和纯化，浓度高达1000 ?g/ml，为高灵敏度RNA结合蛋白研究提供了可靠工具。

核心规格参数

项目 | 详细信息

靶点 | Pumilio 1 (PUM1)

反应性 | 小鼠、人

应用 | IP, WB

宿主 | 山羊

免疫原 | 第225-275位氨基酸区域

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

亚型 | IgG

偶联物 | 非偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

保存条件 | 2-8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

应用方法与推荐稀释度

蛋白质印迹（WB）

所有WB实验使用含5%脱脂牛奶的TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育。

二抗系统：使用驴抗山羊IgG重链和轻链抗体（货号A50-101P）作为二抗。

推荐稀释度：1:2000 1:10,000

操作要点：

封闭充分可降低非特异性背景

一抗过夜孵育建议在4°C条件下进行

洗膜步骤建议使用TBST洗涤3次，每次5-10分钟

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解液

操作建议：

1. 将6 ?g抗体与含1 mg蛋白的细胞裂解液混合

2. 4°C孵育1-2小时或过夜

3. 加入蛋白A/G琼脂糖珠，继续孵育1-2小时

4. 充分洗涤沉淀复合物（建议4-5次）

5. 使用SDS上样缓冲液洗脱，煮沸变性后进行WB检测

产品背景信息

蛋白功能概述

Pumilio 1（Pumilio同源物1）是一种进化上高度保守的RNA结合蛋白，主要作为翻译调控因子，参与胚胎发生和生殖细胞发育相关基因的表达调控。该蛋白在多种组织类型中广泛表达，与生殖细胞特异性的Pumilio 2具有同源性。

分子机制

Pumilio 1通过其C端RNA结合结构域识别靶mRNA的特定序列（通常为“UGUANAUA”基序），招募其他翻译抑制因子（如CNOT死烯化复合物），从而抑制靶mRNA的翻译或促进其降解。该机制在干细胞维持、神经元突触可塑性及细胞衰老过程中发挥关键作用。

研究意义

Pumilio 1功能异常与多种疾病相关，包括神经系统发育缺陷、癌症进展及生殖障碍。因此，高特异性的Pumilio 1抗体对于以下研究至关重要：

RNA-蛋白相互作用分析

翻译调控机制解析

疾病模型中Pumilio 1表达水平的定量检测

免疫共沉淀结合质谱鉴定新型相互作用蛋白

别名列表

HSPUM

PUMH

PUMH1

pumilio homolog 1

pumilio-1

PUML1

SCA47

保存与稳定性注意事项

1. 保存温度：2-8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致抗体变性及活性损失。

2. 有效期：收货之日起1年内稳定。

3. 防腐剂：缓冲液中含有0.09%叠氮化钠作为防腐剂，使用时应遵守相关实验室安全规范（如避免摄入、接触皮肤）。

4. 分装建议：若需长期使用，可将抗体分装成单次用量的小份，分装后仍应保存于2-8°C，避免冷冻。

功能性优势总结

1. 高浓度配方（1000 ?g/ml）：减少抗体使用体积，便于实验设计及长期批量实验的一致性。

2. 亲和纯化工艺：特异性识别Pumilio 1第225-275位氨基酸区域，与非特异性蛋白交叉反应极低。

3. 广谱反应性：同时识别人和小鼠样本，适用于跨种属比较研究。

4. 双重应用验证：IP与WB均经过优化验证，降低方法开发的时间成本。

5. 明确的工作浓度：WB（1:2000-1:10000）和IP（6 ?g/mg裂解液）提供具体起始条件，便于快速复现实验结果。

常见应用场景举例

应用场景 | 推荐实验方案

细胞系中Pumilio 1表达量检测 | WB，1:5000稀释，检测30-50 ?g总蛋白

小鼠组织裂解液中蛋白水平比较 | WB，1:4000稀释，使用组织特异性内参

内源性Pumilio 1免疫共沉淀 | IP（6 ?g/mg裂解液），结合WB检测或质谱分析

RNA结合蛋白复合物纯化 | IP后提取RNA进行qRT-PCR或测序