兔抗CKIIα'抗体亲和纯化：免疫沉淀与蛋白质印迹双重应用的技术详解

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的CKII alpha'抗体（货号：A300-199A）是一款靶向人类酪蛋白激酶II alpha'亚基（CKII α'）C末端区域的兔源多克隆抗体。该抗体以全IgG形式提供，经抗原亲和纯化，未偶联标记物，浓度为1000 ?g/ml，适用于小鼠和人类样本的免疫沉淀（IP）及蛋白质印迹（WB）检测。

本抗体为研究细胞周期调控、电离辐射应激响应及细胞凋亡信号通路中的CKII激酶复合物功能提供了可靠的工具。

二、关键规格参数

2.1 免疫原与表位特异性

免疫原对应人类酪蛋白激酶2 alpha 2亚基（CKII α'）第300位氨基酸至C末端（第350位）之间的区域，参考序列号为NP_001887.1（GeneID 1459）。  

该表位位于蛋白的调控或相互作用结构域内，可确保抗体对α'亚基的特异性识别，避免与CKII alpha亚基（CKII α）发生交叉反应。

2.2 物理与生化性质

参数 | 详情

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化（使用固定化表位）

浓度 | 1000 ?g/ml（A280法测定，1 mg/ml IgG吸光度1.4）

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮钠

同型对照 | IgG

抗原种属 | 人类

反应种属 | 小鼠、人类

2.3 储存与稳定性

储存条件为2–8°C，严禁冷冻。自收货之日起有效期一年。缓冲液中的叠氮钠可作为抗菌防腐剂，但在某些检测体系（如HRP偶联二抗系统）中可能需透析去除。

三、应用方法与推荐稀释比

3.1 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 总蛋白裂解液。  

注意事项：该抗体在IP实验中需配合适当的二抗检测系统。产品说明建议：若对免疫沉淀后的产物进行蛋白质印迹检测，应使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020），以降低重链干扰。

3.2 蛋白质印迹（WB）

推荐稀释范围：1:2,000 – 1:10,000。  

标准操作流程：  

封闭液与抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST。  

一抗孵育：推荐过夜（4°C或室温）。  

二抗系统：对于细胞裂解液的直接WB，可使用山羊抗兔IgG（H+L）抗体（货号A120-101P）；对于IP产物的WB，务必使用轻链特异性二抗并加猪血清。

3.3 通用注意事项

不同批次细胞或组织样本的最佳稀释比可能略有差异，建议用户进行梯度预实验。  

叠氮钠会抑制HRP活性，使用含叠氮钠的抗体进行WB或IP前，如后续涉及HRP标记二抗，需通过透析或稀释降低叠氮钠浓度至0.01%以下。

四、产品背景与生物学意义

4.1 CKII激酶复合物结构

酪蛋白激酶II（CKII）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在细胞周期进程中不可或缺。其典型结构为异源四聚体：包含两个催化亚基（α 或 α'）和两个非催化调节亚基（β）。  

CKII α：由基因CSNK2A1编码。  

CKII α'：由基因CSNK2A2编码，即本抗体靶向的亚基。

尽管α和α'在某些功能上可相互代偿，但在电离辐射（IR）诱导的DNA损伤响应中，两者独立发挥作用，共同抑制细胞凋亡信号。

4.2 别称

CK II alpha'；CK2A2；CK2alpha'；casein kinase 2 alpha'等

4.3 研究应用方向

1. 细胞周期调控：CKII磷酸化多种底物，参与G1/S及G2/M检查点控制。  

2. DNA损伤应答：电离辐射后，CKII α'独立于α亚基发挥抗凋亡功能，本抗体可用于区分两种亚基的作用。  

3. 激酶复合物组装：通过免疫沉淀结合WB，分析α'与β亚基的相互作用。

五、操作建议与常见问题排查

5.1 免疫沉淀优化建议

确保裂解液中含有蛋白酶抑制剂（如PMSF、cocktail）和磷酸酶抑制剂，因CKII本身为激酶，避免去磷酸化干扰。  

推荐使用蛋白A/G磁珠或琼脂糖珠，每毫克总蛋白加入6 ?g抗体后，4°C旋转孵育2–4小时或过夜。  

洗涤缓冲液可使用含0.1–0.5% NP-40或Tween-20的TBS或PBS，以降低非特异性背景。

5.2 蛋白质印迹常见问题

问题 | 可能原因 | 解决方案

多条非特异条带 | 多克隆抗体固有特性 | 提高稀释比至1:10,000；优化封闭时间

无信号或信号弱 | 蛋白表达量低 | 增加上样量；使用阳性对照（如HeLa或293T裂解液）

背景高 | 二抗非特异性结合 | 使用轻链特异性二抗进行IP-WB；增加洗涤次数

5.3 阳性对照建议

细胞系：HeLa、HEK293、NIH/3T3（小鼠）  

处理条件：可不处理（CKII α'组成型表达），或使用20–50 ?M DRB（CKII抑制剂）处理以观察信号下降。