兔抗PELP1/MNAR抗体亲和纯化，经济适用于大规模筛选

PELP1（脯氨酸、谷氨酸和亮氨酸丰富蛋白1，也称MNAR）是一种多功能支架蛋白，参与核受体信号转导、非基因组激素作用以及肿瘤发生等多种生物学过程。针对这一靶点的特异性抗体是研究其功能机制的关键工具。本文详细介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗PELP1/MNAR亲和纯化多克隆抗体（货号：A300-180A）的技术规格、生产工艺、应用条件及性能特点，为研究人员提供实用的操作参考。

一、产品基本规格

该抗体为兔多克隆抗体，靶向人PELP1/MNAR蛋白，同时与小鼠PELP1具有反应性。抗体形式为完整IgG，未偶联标记物，亚型为IgG。经抗原亲和纯化后，浓度达1000 ug/ml（1 mg/ml），保存于Tris-柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液（pH 7–8）中，含0.09%叠氮钠作为防腐剂。储存条件为2–8°C，自收货之日起有效期为一年。注意：因含叠氮钠，不可直接用于活细胞实验或体内注射；使用前可通过透析或超滤去除叠氮钠。

二、免疫原与表位信息

抗体采用特异性表位亲和纯化工艺。免疫原对应人PELP1/MNAR蛋白第1000至1050位氨基酸之间的区域（参考序列号：AAN41255.1，GeneID 27043）。该区域位于蛋白C端附近，具有较好的抗原特异性。亲和纯化时，将上述表位肽段固定于固相载体，从抗血清中捕获特异性IgG，从而确保抗体识别天然或变性的PELP1蛋白。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

三、推荐的实验应用与稀释条件

以下应用及稀释度均经过验证或提供明确起始范围。所有Western blot实验均使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育过夜。

1. 蛋白质印迹（Western Blot）

推荐稀释度：1:2,000 – 1:10,000

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）二抗（货号A120-101P）

免疫沉淀物WB：需使用抗兔IgG轻链HRP标记二抗，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）。这一设计可避免检测时出现重链的干扰条带，尤其适用于IP后WB分析。

2. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:1,000 – 1:5,000

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0的柠檬酸缓冲液进行热诱导抗原修复。建议根据组织类型优化修复时间（通常95–100°C维持15–20分钟）。

3. 免疫沉淀（IP）

-推荐用量：每毫克细胞裂解液使用6 ug抗体。可依据目标蛋白丰度适当调整，建议预先通过Western blot验证IP效率。

四、靶点生物学背景

PELP1（也称MNAR）最初被鉴定为一种与Src家族激酶（如Lck、c-Src）SH2结构域相互作用的蛋白。后续研究发现，它是一个广泛作用的共调节因子，可与多种核受体（如雌激素受体ERα、雄激素受体、糖皮质激素受体）及转录因子相互作用。PELP1参与非基因组信号通路：与ERα、Src激酶、PI3K、SHC及G蛋白形成称为“信号体”（signalsome）的多蛋白复合物，介导快速的胞内信号转导。

作为转录共调节因子和信号蛋白，PELP1在细胞增殖、凋亡、分化、肿瘤发生及转移中发挥重要功能。其在乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤中异常表达，并与内分泌治疗抵抗相关。因此，该抗体适用于癌症生物学、核受体信号转导、表观遗传调控及药物筛选等领域的研究。

五、产品性能特点

1.高亲和力纯化：使用表位特异性亲和层析，非特异性背景低。经Western blot验证，在人及小鼠细胞裂解液中可检测到预期分子量约150–160 kDa的条带（PELP1分子量因磷酸化及剪接变异存在差异）。

2.宽应用范围：同时适用于WB、IHC和IP，满足蛋白表达分析、组织定位及相互作用研究需求。

3.高稀释比：WB稀释度高达1:10,000，IHC达1:5,000，抗体用量经济。

4.明确表位区域：精确到第1000–1050位氨基酸，便于用户结合自身突变体或截短体实验进行结果解读。

5.交叉反应性：经测试与小鼠PELP1反应，适用于鼠源样本。与其他物种的潜在交叉反应需用户自行验证。

六、实验操作注意事项

1. 样品制备

裂解缓冲液建议使用含蛋白酶抑制剂（如PMSF、cocktail）的RIPA或NP-40裂解液。

对于IP实验，裂解液中盐浓度不宜过高（推荐150 mM NaCl），以免破坏蛋白复合物。

2. 抗体稀释液

WB及IHC一抗稀释可使用含5%脱脂牛奶或3% BSA的TBST。叠氮钠会抑制HRP活性，若二抗为HRP标记，务必确保一抗稀释液中不含叠氮钠（本抗体原液含叠氮钠，稀释后浓度极低影响可忽略，但高灵敏度检测建议使用不含叠氮钠的稀释液）。

3. 免疫沉淀流程

每mg裂解液加入6 ug抗体，4°C旋转孵育2小时或过夜。

推荐使用蛋白A或蛋白G琼脂糖珠（兔IgG结合良好）。洗涤步骤使用裂解缓冲液洗涤3–5次，每次5分钟。

4. IHC关键步骤

脱蜡与水化后，务必进行抗原修复。柠檬酸缓冲液（pH 6.0）微波或高压修复均可。

内源性过氧化物酶阻断（3% H2O2处理10–15分钟）适用于非荧光检测。叠氮钠不影响IHC显色系统。

七、储存与稳定性

原液于2–8°C避光保存，切勿冷冻。冷冻会导致蛋白聚集及活性下降。在推荐缓冲液（含叠氮钠）中，抗体至少稳定一年。若需长期储存（超过一年），建议分装后冷冻于-20°C或-80°C，但需注意反复冻融不宜超过2–3次。叠氮钠在冷冻条件下仍可抑菌，但分装可减少污染风险。