兔抗gamma-H2AX亲和纯化抗体--低背景高信噪比，适用于FFPE组织切片

一、产品基本规格

项目 | 规格

靶标| gamma-H2AX（γ-H2AX）

验证反应种属| 小鼠、人

适用应用| ICC（免疫细胞化学）、IHC（免疫组织化学）、WB（蛋白质印迹）

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗体形式| 完整IgG

免疫原| 人组蛋白H2AX磷酸化丝氨酸140位点周围序列

同种型| IgG

标记类型| 未偶联（Unconjugated）

纯度| 抗原亲和纯化

抗原种属来源| 人

工作浓度| 1000 ?g/ml

储存条件| 2 - 8 °C

有效期| 自收货之日起1年

缓冲体系| Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮化钠

二、产品制备与质量控制

本抗体由艾美捷代理Bethyl推出，货号：A300-081A，采用抗原亲和纯化工艺制备，具体流程与质控参数如下：

亲和纯化：使用固相载体上固定的gamma-H2AX特异性表位肽段进行亲和层析，确保高特异性识别磷酸化丝氨酸140位点。

浓度测定：免疫球蛋白浓度通过比尔定律（Beer‘s Law）确定，以1 mg/mL IgG在A280波长下吸光度为1.4作为换算基准。

表位定位：识别表位对应于人组蛋白H2AX磷酸化丝氨酸140位点周围区域，参考序列编号NP_002096.1（GeneID 3014）。

三、靶标生物学信息

H2AX是组蛋白H2A家族成员之一。核心组蛋白H2A、H2B、H3和H4共同参与核小体结构的形成，调控染色质的高级构象。H2AX在DNA双链断裂（DSB）发生后，其丝氨酸140位点被ATM/ATR/DNA-PK等激酶迅速磷酸化，形成gamma-H2AX焦点（foci），作为DNA损伤修复信号通路的关键启动元件。近年研究表明，H2AX是维持基因组稳定性的必需因子，其功能缺失与肿瘤发生、免疫缺陷及早衰等多种病理状态密切相关。

四、推荐实验条件与操作要点

以下为各应用场景的推荐稀释比例及关键操作参数，供实验设计参考。

1. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:2,000 ~ 1:10,000

抗原修复：推荐使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（HIER），适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片。

适用范围：组织切片中gamma-H2AX焦点的原位检测，适用于DNA损伤组织学评估。

2. 免疫细胞化学（ICC）

推荐稀释比：1:2,000 ~ 1:10,000

抗原修复：推荐使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复，适用于FFPE细胞切片。

适用范围：培养细胞中gamma-H2AX焦点的原位检测，适用于细胞水平DNA损伤响应分析。

3. 蛋白质印迹（WB）

推荐稀释比：1:10,000 ~ 1:25,000

封闭与稀释液：5% Milk-TBST（含Tween-20的TBS缓冲液）

一抗孵育：推荐4°C孵育过夜（O/N），以确保低丰度信号的有效检测。

二抗推荐：建议使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（如A120-101P）进行信号放大。

适用范围：细胞裂解液中总蛋白的gamma-H2AX表达水平及磷酸化程度分析。

4. 通用操作注意事项

样本制备：WB实验建议使用新鲜制备的细胞裂解液，并添加磷酸酶抑制剂以防止去磷酸化。

阳性对照：推荐使用经电离辐射（IR）或喜树碱（Camptothecin）处理的细胞裂解液作为阳性对照，以确保实验体系正常。

叠氮化物注意事项：缓冲液含0.09%叠氮化钠作为防腐剂，使用时应避免与HRP偶联二抗共用（叠氮化物会抑制HRP活性），若后续检测体系涉及HRP标记二抗，建议通过透析或脱盐柱去除叠氮化物。

五、储存与稳定性

储存条件：2 ~ 8°C冷藏保存，严禁冷冻。

有效期：自收货之日起1年内保持稳定。

分装建议：如需长期使用，建议按单次用量分装后储存于2 ~ 8°C，避免反复取用导致污染或活性下降。

六、应用场景建议

本抗体适用于以下研究领域：

DNA双链断裂损伤检测：作为DNA损伤的标志物，gamma-H2AX的焦点形成可反映辐射、化疗药物或基因毒素引起的损伤程度；

基因组稳定性研究：用于评估H2AX在维持染色体稳定性中的作用；

肿瘤放疗/化疗反应监测：可用于肿瘤组织中DNA损伤响应的定性与半定量评估；

药物毒理学筛选：作为化合物遗传毒性评估的快速筛查指标。