兔抗BRCA1亲和纯化抗体，精准识别BRCT结构域，适用于免疫沉淀与WB

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗体为兔源多克隆抗体（货号：A300-000A），特异性识别人BRCA1蛋白的C末端区域（第1813位氨基酸至C末端）。经抗原亲和纯化，提供完整IgG分子形式，未偶联任何标记物（Unconjugated），浓度为1000 ?g/mL（1 mg/mL）。适用于免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）分析。

产品规格与理化参数

参数项目 详细规格

目标抗原 BRCA1（乳腺癌易感基因1蛋白）

反应种属 人

宿主来源 兔

克隆类型 多克隆

抗体形式 完整IgG

免疫原 第1813位至C末端（第1863位）之间的区域

亚型 IgG

偶联物 无

纯度 抗原亲和纯化

抗原物种 人

浓度 1000 ?g/mL（1 mg/mL）

保存条件 2–8 °C

有效期限 自收货起1年

缓冲体系 枸橼酸-磷酸盐-Tris缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

浓度测定依据：采用比尔定律（Beer’s Law），标准为1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光值（A280）为1.4。

抗原背景：BRCA1蛋白的功能与结构

BRCA1（Breast Cancer Type 1 Susceptibility Protein）是一种重要的肿瘤抑制蛋白，其种系突变与女性乳腺癌和卵巢癌的易感性显著相关。

核心功能：

参与DNA损伤应答与细胞周期检查点调控，维持基因组完整性

调控多种相互作用蛋白的活性，涉及基因转录、转录抑制、蛋白磷酸化和泛素化等过程

作为E3泛素连接酶（RING finger蛋白53，RNF53）参与底物蛋白的泛素化修饰

本抗体的靶向优势：识别C末端区域（1813–1863），适用于检测全长BRCA1以及保留C末端的截短突变体。该区域包含部分BRCT结构域，对功能研究具有重要意义。

别名信息：  

BRCA1、BRCC1、BROVCA1、FANCS、IRIS、PNCA4、PPP1R53、PSCP、RNF53、BRCAI、早期发作乳腺癌1、范可尼贫血互补群S。

生产与纯化流程

1. 免疫原设计：选择人BRCA1蛋白C末端区域（第1813–1863位氨基酸）的合成肽段或重组蛋白

2. 免疫方案：免疫兔，诱导产生多克隆抗血清

3. 亲和纯化：将表位特异性肽段固定在固相支持物上，从抗血清中亲和捕获特异性抗体

4. 浓度标定：A280法，1 mg/mL对应吸光值1.4

5. 缓冲体系：Tris-枸橼酸-磷酸盐缓冲液（pH 7–8），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂

适用范围与推荐使用条件

> 重要说明：本抗体的应用经验主要集中于免疫沉淀（IP）和Western blot（WB）。使用前建议根据样本类型和表达丰度进行预实验优化。

应用技术 推荐使用条件 备注

免疫沉淀（IP） 6 ?g抗体/毫克裂解液 按总蛋白质量计算抗体用量

蛋白质印迹（WB） 1:1,000 – 1:10,000 推荐使用3–8% Tris-醋酸酯凝胶

Western blot 详细操作指南

标准WB流程（细胞裂解液）

以下参数已由生产实验室验证并推荐：

凝胶类型：3–8% Tris-醋酸酯梯度胶（BRCA1分子量较大，约220 kDa，低浓度凝胶有助于大分子量蛋白的有效分离和转移）

封闭液：5% 脱脂牛奶-TBST

抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST（与封闭液一致）

一抗孵育：过夜（推荐4°C摇床孵育，或室温过夜）

二抗：山羊抗兔IgG（重链+轻链），货号 A120-101P（或其他等效产品）

注意：对于细胞裂解液样本的直接Western blot，使用识别重链和轻链的二抗即可。

免疫沉淀后Western blot的特殊要求

当本抗体用于免疫沉淀实验，随后对免疫沉淀复合物进行Western blot检测时，由于洗脱产物中包含用于IP的抗体（来自兔）的重链（约55 kDa）和轻链（约25 kDa），这些抗体片段会被常规的二抗（抗兔IgG H+L）识别，可能在目标蛋白（BRCA1，约220 kDa）附近或轻链/重链位置产生干扰条带。

优化方案（生产实验室推荐）：

1. 二抗选择：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（仅识别兔IgG轻链，避免识别重链）

2. 封闭液补充：在封闭缓冲液中加入5% 正常猪血清（货号 S100-020），进一步降低非特异性背景

储存与稳定性

储存条件：

温度：2–8°C（严禁冷冻）

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮化钠，有效抑制微生物生长

分装建议：如需长期保存，可无菌分装为单次使用量，仍储存于2–8°C（不推荐-20°C，可能引起蛋白聚集）

有效期：自收货之日起12个月。超过有效期后使用，建议重新验证效价。